柱前衍生反相高效液相色谱法测定小麦中氨基酸含量.pdfVIP

第 33 卷 分析化学（FENXI HUAXUE） 研究报告 第 l2 期 2005 年 l2 月 Chinese Journal of Analytical Chemistry l689 ~ l692 柱前衍生反相高效液相色谱法测定小麦中氨基酸含量 ， 陈华萍l 2 陈 黎l 魏育明l 郑有良＊l （四川农业大学小麦研究所l ，大学生命科学与理学学院2 ，雅安 6250l4） 摘 要 以肌氨酸为内标物，邻苯二甲醛-9-芴甲基氯甲酸酯为柱前衍生剂，用 ODS 色谱柱在柱温 40C 下，采 用二元梯度洗脱，DAD 检测器在 338 nm 波长处检测，建立了一种利用反相高效液相色谱同时测定小麦籽粒 中 l7 种氨基酸的方法。氨基酸浓度在 5 ~ 800 !mol / L 范围内，其峰面积与内标物峰面积的比值和氨基酸浓 度的线性相关系数均大于 0. 996；l7 种氨基酸的加标回收率在 97. 5% ~ l03. l% 范围内。应用本方法对小麦 籽粒中氨基酸含量进行测定，取得了较理想的结果。同时，本法还可应用于糙米和玉米等粮食中氨基酸含量 的测定。 关键词 高效液相色谱法，柱前衍生化，邻苯二甲醛，肌氨酸，氨基酸，小麦 ! 引 言 测定食物中氨基酸含量，一般采用氨基酸分析仪柱后衍生的方法［l］。但氨基酸分析仪价格昂贵、 ［ ］ 分析时间长。70 年代以来，柱前衍生高效液相色谱法开始应用于氨基酸的测定 2 ~ 4 。然而，单独采用 ［ ］ ［ ］ ［ ］ ［ ］ 的印三酮法 5 、异硫氰酸苯酯（PITC）法 6 、邻苯二甲醛（OPA）法 7 、9-芴甲基氯甲酸酯（FMOC）法 8 及 ［ ］ 丹酰氯（Dansyl-Cl）法 9 均存在精密度和重现性较差等问题。6-氨基喹啉基-!-羟基琥珀酰亚氨基甲酸 酯（AOC）和 2，4-二硝基氯苯（ CDNB）是两种新发展起来的衍生试剂。AOC 与一、二级氨基酸均起反 ［ ］ 应，紫外检测灵敏度高 l0 ，但 AOC 水解后产生的 6-氨基喹啉有很强的紫外吸收，在氨基酸衍生物的峰 前形成一个大的试剂峰并伴有拖尾现象，从而干扰天门冬氨酸、丝氨酸等氨基酸的测定。苗虹等［ll］用 AOC 法测定奶粉、猪肉松等的氨基酸含量，取得了较为满意的结果。CDNB 法目前在国外尚未见报道。 ［ ］ CDNB 法的柱前衍生和色谱条件与 2，4-二硝基氟苯（FDNB）法类似 l2 。与 FDNB 法相比，CDNB 法衍生 ［ ］ ［ ］ 剂价廉、理化性质稳定 l0 。吴艳等 l3 用 CDNB 法分析碱性氨基酸，得到了较好的分离效果。 衍生剂 OPA 具有反应速度快、灵敏度高等优点，但不能和仲氨酸反应；而 FMOC 衍生剂却能与仲氨 酸反应，且不受样品基质（如盐分）的干扰。因此，本实验采用