高效液相色谱法测定1,3-丙二醇发酵液中的有机酸.pdfVIP

第 34 卷 分析化学 FENXIHUAXUE) 研究简报 特刊 2006 年 9 月 ChineseJournaIofAnaIyticaIChemistry Sl83 ~Sl86 高效液相色谱法测定 13-丙二醇发酵液中的有机酸 牟 英l 王元好l 修志龙＊l 王龙星2 肖红斌2 l 大连理工大学环境与生命学院生物科学与工程系,大连 ll6024) 2 中国科学院大连化学物理研究所,大连 ll6023) 摘 要 采用高效液相色谱法在 KromasiICl8 色谱柱 5 Pm,250 mmX4.6 mmi.d.)上测定了 l,3-丙二醇发酵 液中的有机酸,流动相为 0.2% V/V)磷酸和乙睛混合溶液 体积比为 96.533.5),发酵液经氯仿处理后直接 分离定量,8 min 内可将发酵液中的甲酸~乳酸~乙酸~琼琅酸~柠檬酸及延胡索酸完全分离定量0 流动相流速 为 l.0 mL/min,紫外检测波长为 2l4 nm,柱温为 20C0 方法的回收率为 97.7% ~l00.5%;RSD为 0.98% ~ 2.35%0 实验结果表明,该法是测定发酵液中有机酸的快速~有效的定量分析方法0 关键词 反相高效液相色谱,有机酸,l,3-丙二醇,发酵液 1 引 言 l,3-丙二醇 l,3-PD)可应用于油墨~涂料~抗冻剂~保护剂以及医药等行业,可以作为生产优质的聚 酯和聚氨酯的单体,因此具有广阔的应用前景 l] 0 在 l,3-PD发酵过程中,生成 l,3-PD的同时还有其它一些有机酸生成0 对有机酸的分析可以比较 直观地了解菌种代谢途径,对于确定菌体内的代谢通量分布~从代谢工程角度实现菌体生理代谢网络途 径的优化或阻遏以改变代谢流~发酵过程的优化控制以及 l,3-PD高产基因工程菌株的构建都具有重要 意义0 用于分析有机酸的方法有色谱法~薄层色谱法 2] 和气相色谱法 3] ,但这些方法都要进行衍生化 处理,操作麻烦0 而高效液相色谱法 HPLC) 分析有机酸不仅简单快速,而且选择性好~准确度高 4] 0 BIanco等 5] 采用液相色谱法分析酒中有机酸;Ding 6] 和牟世芬 7] 用离子色谱法测定了酒和饮料中的有 机酸;Caccamo等 8] 采用衍生化液相色谱法分析酒中有机酸;Daood 等 9] 以四丁基氢氧化按作离子对试 剂,分析了果汁和蔬菜中的有机酸0 衍生化法和添加离子对试剂都使操作变得繁琐,而专门的有机酸柱 l0] 价格又较昂贵0 白冬梅等 采用 EcIipseXDB-C8 柱,对琼琅酸发酵液中有机酸进行了测定,4.5 min 可 以把 6 种混合酸标样分离定量,分析速度快,重现性也较好0 但从得到的标准样的色谱图可以看出,峰 拖尾严重而且未能达到基线分离,甲酸和苹果酸的出峰时间都在 2 min 内,这样会造成在分析复杂的发 酵液样品时受到其他组分的干扰,而且在分析实际样品时,只得到两种有机酸的含量,信息量较少0 本 实验选用普通的 KromasiICl8 色谱柱,对以前的高效液相色谱法 多采用硫酸或磷酸缓冲体系)进行了改 进,在磷酸缓冲液中添加了适量乙睛,建立了测定 l,3-PD发酵液中有机酸的方法,8 m