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蛋白质的沉淀与透析选编
蛋白质的沉淀与透析;一、实验目的;二、实验原理 ;三、器材与试剂;四、操作步骤;3、蛋白质的透析
(1)准备透析袋
市售的透析袋有重金属、硫化物等化学杂质,须除去杂质后才能使用,常用的方法是用10mmol/LNaHCO3-1mmol/LEDTA-Na2溶液煮沸30min,然后用双蒸水充分洗涤透析袋,储存于1mmol/LEDTA-Na2溶液中,4摄氏度保存备用。
(2)装样?
取一段透析袋,将其一端用透析袋夹夹住(或打一死结),由开口端加入含清蛋白沉淀的溶液(不可装的太满,留出一半空隙,并适当排出空气,以防透析袋胀破),用透析袋夹夹住袋口(或打一死结)。???
;(3)透析
如右图,取一个大烧杯,加入10倍以上样品液体积的去离子水或缓冲溶液,将装好样品的透析袋悬于大烧杯中部,底部放一个磁子,用磁力搅拌器缓慢搅拌以促进溶液交换,透析过程中需更换洗脱溶液数次(约30min一次)???至达到透析平衡为止(洗出液中无Clˉ和NH4+),约需2h。;?(4)检查透析效果?
每次更换洗脱液时,同时检查洗出液中是否有Clˉ。
Clˉ检查方法:
取试管一支,加入洗出液约2ml,加10%HNO3溶液1-2滴至酸,然后加1%AgNO3?2-3滴,观察是否有白色沉淀。;五、要点提示??;六、思考题;谢谢观看!
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