20130513-2011级兽医免疫学实验10-酶联免疫吸附试验曾显成)CSFok.pdfVIP

2011级动物医学专业实验课 预防兽医学实验（一） 曾显成 Tel E-mail:zxc206@163.com QQ 免疫学部分实验安排 实验七：凝集试验 实验八：猪瘟正向间接血凝试验 实验九：荧光抗体试验 实验十：酶联免疫吸附试验 ELISA 实验十、酶联免疫吸附试验 一、实验目的 1、掌握酶联免疫吸附试验的基本原理及 操作方法。 2、了解ELISA抗体检（监）测的意义。 实验十、酶联免疫吸附试验 二、实验准备 1、仪器设备：酶联免疫检测仪，洗板机，离心机，超声 波清洗仪，电脑，打印机，冰柜，冰箱，水浴箱，单道 可调移液器（1~10μL，10~100μL，100~1000μL），8道 道可调移液器（1~50μL，50~300μL） 2、玻璃器皿：加样槽，烧杯，盐水瓶(250mL,500mL),稀释 板，吸头（10μL，300μL），量筒，注射器。 3、待检样品：血清 实验十、酶联免疫吸附试验 二、实验准备 4、ELISA诊断试剂盒：猪瘟或猪伪狂犬抗体检测试剂盒 （购于武汉科前生物公司），主要包括： （1）抗原包被板 2块 （96孔/块） （2）阴性对照 2管 （1.5mL/管） （3）阳性对照 2管 （1.5mL/管） （4）酶标记物 1瓶 （20mL/瓶） （5）样品稀释液 1瓶 （50mL/瓶） （6）20倍浓缩洗涤液 1瓶 （30mL/瓶） （7）底物液A 1瓶 （10mL/瓶） （8）底物液B 1瓶 （10mL/瓶） （9）终止液 1瓶 （10mL/瓶） （10）血清稀释板 2块 （96孔/块） 实验十、酶联免疫吸附试验 血清样品 实验十、酶联免疫吸附试验 试剂盒的存放 实验十、酶联免疫吸附试验 ELISA实验检测一角 实验十、酶联免疫吸附试验 全自动洗板机 实验十、酶联免疫吸附试验 生化培养箱 全自动酶标仪 实验十、酶联免疫吸附试验 移液枪 实验十、酶联免疫吸附试验 三、实验原理 1971年瑞典学者Engvail和Perlmann,荷兰学者Van Weerman和Schuurs分别报道将免疫技术发展为检测体 液中微量物质的固相免疫测定方法，即酶联免疫吸附 测定法 (Enzyme-linked immunosorbent assay , ELISA) 。 实验十、酶联免疫吸附试验 三、实验原理 酶联免疫吸附试验（Enzyme-Linked Immuno sorbent Assays, ELISA）基本原理是酶分子与抗体或抗抗体分子共 价结合，此种结合不会改变抗体的免疫学特性，也不影响 酶的生物学活性。此种酶标记抗体可与吸附在固相载体上 的抗原或抗体发生特异性结合。滴加底物溶液后，底物可 在酶作用下使其所含的供氢体由无色的还原型变成有色的 氧化型，出现颜色反应。因此，可通过底物的颜色反应来 判定有无相应的免疫反应，颜色反应的深浅与标本中相应 抗体或抗原的量呈正比。 实验十、酶联免疫吸附试验 三、实验原理 此种显色反应可通过ELISA检测仪进行定量测定，这 样就将酶化学反应的敏感性和抗原抗体反应的特异性结合 起来，使ELISA方法成为一种既特异又敏感的检测方法。 该方法既可检测抗原，也可以用来测抗体。 由于ELISA具有快速、敏感、简便、易于标准化等优 点，使其得到迅速的发展和广泛应用。尤其是采用基因工 程方法制备包被抗原，采用针对某一抗原表位的单克隆抗 体进行阻断ELISA试验，都大大提高了ELISA的特异性， 加之电脑化程度极高的ELISA检测仪的使用，使ELISA更 为简便实用和标准化。 实验十、酶联免疫吸附试验 三、实验原理 常用的ELISA方法有