植入前遗传学诊断的研究现状及展望的论文.docVIP

　　植入前遗传学诊断的研究现状及展望的论文 遗传性疾病已经成为威胁人类健康的主要疾病之一。在没有找到一种 有效的治疗方法之前，用产前诊断技术预防遗传病患儿的出生，是达到减少乃至杜绝遗传病发生的主要途径。本世纪60年代以来，羊膜腔穿刺技术、绒毛膜取样技术已经常规地应用于围产儿监测，有效地减少了遗传病患儿的出生, 同时产前诊断技术本身也得到了不断的发展，主要表现在两个 方面：无创性产前诊断及植入前遗传学诊断（preimplantation geic diagnosis, pgd)。pgd指对配子或移入到子宫腔之前的胚胎进行遗传学分析，去除有遗传缺陷的配子或胚胎。它可以有效地避免传统的产前诊断技术对异常胚胎进行治疗性流产的要求，因而受到广泛关注。1989年，英国handyside成功地用聚合酶链反应（pcr）技术分析卵裂球的性别构成，完成了世界上第一例pgd诊断，开创了产前诊断的新纪元。进入90年代，植入前诊断技术有了飞速发展。1994年，monne 用荧光原位杂交(fluorescent in situ hybridization， fish)技术，在植入前诊断染色体非整倍体及胚胎性别获得成功。此后，多重pcr，荧光pcr，多色fish等技术，特别是1999年以来开展的间期核转换（interphase nucler conversion )技术，全基因组扩增（e amplification,ic hybridization，cgh)技术相继用于pgd，进一步促进了该技术的研究和应用。.目前 在全世界范围内，包括我国在内，已有18个国家，50多个pgd中心在从事相应的研究，已经分娩的100多例新生儿发育良好，初步证实pgd是一种安全、可靠的产前诊断技术。 　　一、pgd的研究进展 　　1．取材途径：pgd是指在胚胎移入到宫腔之前的诊断。其获取诊断标本的途径主要有：（1）获取精子或卵子进行诊断，（2）获取植入前的胚胎细胞进行dna或染色体分析。 　　受精前取配子进行诊断的报道，目前尚不多。这 种方法关键在于如何完成精子或卵子的遗传分析，同时又不影响其受精能力。已有报道，用流式细胞仪分离x、y精子，用于植入前筛选胎儿的性别。而用卵子进行pgd，主要是利用第一极体或第二极体的遗传学分析，间接推断卵子正常与否。现在，可以利用极体的dna进行单基因病的诊断，也可以用核转换技术，将极体由间期激活成中期，再用cgh技术分析其所有的染色体组成，或直接对极体的某些染色体进行fish分析，诊断这些染色体有无数目异常。但是，用极体分析来推断卵子的基因组或其染色体结构和数目，并不能完全反映卵子遗传组成的真实情况，有时也必须同时分析第一极体和第二极体，才能判断卵子的染色体有无异常。 　　卵裂球活检是现在pgd取材的主要途径。一般选6～10细胞期的卵裂球，此期的细胞具有全能分化的潜能，取出1～2个细胞，不会影响胚胎的发育。 　　囊胚期活检是pgd诊断的另一潜在途径。这种方法是在体外将受精卵培养到囊胚期，取其滋养外胚层细胞进行遗传分析。因为不影响内细胞团，故不会累及胚胎发育。受培养技术的限制，多数胚胎不能在体外很好地发育到囊胚期。因此，无法获取囊胚期细胞进行pgd。最近，veiga等（1999年）改进了培养方法，在体外培育后，可达到囊胚期的胚胎占39.3%，推测囊胚期活检有望成为一种有效的取材方法。虽然取一定数量的囊胚期细胞不会影响胚胎的正常发育,但内细胞团和滋养外胚层细胞的遗传构成并非完全相同，故用滋养外胚层细胞进行pgd有可能造成误诊。诊断时分别用几个细胞分析比用单个细胞诊断的方法更 好，可以降低误诊率。 　　2.基因病诊断: 目前可诊断的单基因病包括地中海贫血，纤维囊性化，脆性x综合征，以及和性连锁遗传病有关的性别诊断等，可诊断的病种数目在不断增加。所用的方法主要是基于pcr技术的dna分析，通过检测单细胞靶基因的数目及结构有无异常加以诊断。常规的pcr技术易受实验条件的影响，故从90年代后期开始，荧光pcr，多重pcr，巢式pcr技术用于pgd诊断的报道逐渐增加，有效地提高了诊断率。 　　染色体数目异常的诊断有两种途径：用传统的染色体计数及用荧光pcr进行多态位点定量分析。荧光pcr是近年发展起来的新技术，敏感度很高。对多细胞水平的定量分析来说，它是一种稳定可靠的技术，但因选择性扩增的缘故，单细胞的定量分析中有25%的诊断结果不可靠。荧光pcr已用于21三体的植入前诊断。随着荧光pcr定量检测技术的广泛应用，现正在开发一种同步检测技术，以便实时测定荧光pcr的扩增效果,并进一步提高其诊断的可靠性，促进该技术的临床应用。 　　在基因病诊断以及染色体病诊断的过程中，主要的限制因素之一是，如何获取满足诊断需求的dna。解决的途径主要靠ed pcr, dop-