胃癌组织中微血管密度的测定及其临床意义的论文.docVIP

　　胃癌组织中微血管密度的测定及其临床意义的论文 【摘要】 ［目的］ 探讨胃癌组织中微血管密度（mvd）与临床病理因素及预后的关系。［方法］应用免疫组织化学技术检测118例胃癌组织中cd34蛋白的表达，以cd34阳性血管数作为微血管密度（mvd），以镜下200倍视野范围内任选不重复的5个视野，计数阳性血管数。［结果］ 所有胃癌组织中的平均mvd为54.90±2.61个/mm2；浸润性生长的肿瘤组织中mvd值明显高于膨胀性生长者（t=3.91，p＜0.001），mvd值与浸润深度（t=6.41，p＜0.001）、血管侵犯（t=7.96，p＜0.001）、淋巴结转移（t=8.45，p＜0.001）、远处肝转移（t=7.65，p＜0.001）和腹膜转移（t=10.46，p＜0.001）显著相关；mvd值≥54.9个/mm2患者的平均生存时间为24.48±2.42个月，显著低于mvd值＜54.9个/mm2患者的44.70±4.68个月（t=2.83，p＜0.01），mvd值≥54.9个/mm2患者的5年生存率6.2%（17/47）显著低于mvd值＜54.9个/mm2患者的38.5%（6/71）（χ2=12.14，p＜0.001）。［结论］ mvd与胃癌浸润转移及预后显著相关，可以作为反映胃癌生物学行为和判断预后的生物学指标。 【关键词】 胃肿瘤 微血管密度 免疫组织化学 预后 肿瘤生长依赖新生血管形成，新生血管形成程度与肿瘤恶性行为及转移的发生有关[1]。.cOm近年来，关于恶性肿瘤血管形成的研究成为一个新的热点，在这些研究中，常用因子ⅷ相关抗原、cd31、cd34等染色来显示微血管，其中以cd34标记较为理想[2]。我们使用对cd34染色的免疫组织化学技术，检测胃癌组织中的微血管密度（microvascular density，mvd），并分析其与临床病理因素及预后的关系，为胃癌临床抗转移治疗提供科学依据。 1 材料与方法 1.1 一般材料 收集浙江省人民医院外科1990年10月~2000年11月间术前未经抗肿瘤治疗的手术切除的胃癌组织石蜡标本118例，均有5年以上完整随访资料；患者男性79例，女性39例，平均年龄57.6岁（38岁~78岁）。按，多聚赖氨酸防脱片。制成的切片置于70℃烤箱内烤2~3h，放入58℃烤箱过夜。烤好的切片用锡纸包好，于4℃冰箱或室温中保存，备染he和免疫组织化学染色。免疫组织化学试剂：cd34（鼠抗人）和sp试剂盒购自福州迈新生物技术有限公司，cd34工作浓度为1∶100。免疫组织化学步骤：采用链霉素抗生物素蛋白—过氧化物酶连接法（s-p法）。操作按说明书进行，主要包括石蜡切片、常规脱蜡至水、抗原修复、3％h2o2阻断内源性过氧化物酶，山羊血清封闭、滴加一抗、二抗及链霉素、抗生物素蛋白—过氧化物酶复合物、dab显色、复染封片。 1.3 判断标准 肿瘤组织内mvd计数原则：①与邻近的微血管、肿瘤细胞或其他结缔组织成分不相连的标记为棕色的内皮细胞或内皮细胞簇均作为一个可计数的微血管。②可能源于同一血管、只是位置不同的血管内皮细胞均作为独立的微血管。③血管腔及红细胞不是确定微血管的依据。④肿瘤硬化区、肿瘤细胞稀少区及邻近良性组织区域的微血管不进行计数。⑤肌层较厚及管腔面积大于8个红细胞直径的血管不计数。肿瘤组织内mvd的计算：首先低倍镜下扫视整个组织切片，找到内皮细胞和瘤细胞染色清晰，背景对照良好，微血管数量最密集，肿瘤细胞分布最多的视野，然后根据以上原则，在200×视野范围内任选不重复的5个视野，计数阳性血管数，以cd34阳性血管数作为微血管密度（mvd），并用x±s表示。 1.4 统计学处理 采用spss11.0统计软件进行数据分析，计量资料采用t检验进行分析，计数资料采用χ2检验进行分析；对生存数据采用kaplan-meier分析并绘制生存曲线，应用log-rank检验差异性，检验水准以p＜0.05为有显著性差异。 2 结 果 2.1 mvd的分布及定量 血管内皮细胞cd34染色阳性，癌组织内及癌巢周围多量微血管呈棕黄色至棕褐色，深染，逗点状、小管状或条索状（见图1、2）。在所测118例胃癌组织标本中，mvd计数经检测符合正态分布，范围20.23~90.71个/mm2，均值54.90±2.61个/mm2，以其均数54.90个/mm2为界，高者53例（44.9%），低者65例，占55.1%。 2.2 mvd与临床病理因素之间的关系 浸润性生长、t3~t4期、有血管侵犯及有淋巴结、肝脏和腹膜转移的胃癌组织的mvd值明显高于膨胀性生长、t1~t2期、无脉管侵犯及无淋巴结、肝脏和腹膜转移者，低、未分化与中、高分化胃癌组织的mvd值差异无显著性（见表1）。 2.3 mvd与胃癌患者预