GST与戊型肝炎病毒ORF2编码蛋白融合表达形成的新抗原表位的论文.docVIP

　　GST与戊型肝炎病毒ORF2编码蛋白融合表达形成的新抗原表位的论文 摘要】 　　目的: 以戊型肝炎病毒（hev）orf2编码的重组蛋白p166为例, 研究蛋白标签gst对融合表达的重组蛋白抗原结构的影响。方法: 以hev中国株重组蛋白p166chn-gst为免疫原, 制备单克隆抗体（mab）, 与代表hev 4个基因型的摩洛哥株、 墨西哥株、 美国株和中国株p166的gst或his融合蛋白、 中国株非融合重组蛋白p179chn以及gst融合的hev无关蛋白进行elisa检测, 鉴定mab所识别的抗原表位。 结果: 获得3株稳定分泌抗p166chn-gst的杂交瘤细胞株, 分泌的mab 1a8、 9b4和8h10与p166chn-gst反应, 与gst不反应。其中1a8和9b4可与带gst标签的4种p166-gst蛋白以及n和c端截短的p146chn-gst、 p137chn-gst反应, 而不与4种p166-his蛋白反应, 也不与p179chn反应, 与hev病毒颗粒竞争试验阴性, 与gst融合的hev无关蛋白无交*反应性, 表明1a8和9b4识别的抗原表位不是hev病毒颗粒表面天然存在的抗原表位, 而是gst与hev orf2编码蛋白的465-601aa区段序列共同形成的新的抗原表位。结论: gst能够赋予基因工程重组蛋白以新的抗原特性, 它与融合表达的重组蛋白可以共同形成新的抗原表位。 【关键词】 gst融合表达 戊型肝炎病毒 单克隆抗体 抗原表位 　　identification of a novel antigenic epitope on gst fusion-expressed and orf2-encoded proteins of hepatitis e virus 　　liang jiu-hong, liang li-min△, dong min, han zhen-ge, dong chen, meng ji-hong* 　　department of microbiology and immunology, school of medicine, southeast university, nanjing 210009, china 　　［abstract］ aim: to investigate the effect of a gst tag on the antigenic structure of gst fusion-expressed and orf2-encoded rebinant proteins of hepatitis e virus (hev). methods: the monoclonal antibodies (mab) a chinese hev strain. then they hev reference strains of all 4 genotypes and other non-hev rebinant proteins. results: three mab named 1a8, 9b4 and 8h10 reacted to p166chn-gst but did not react to gst. mab 1a8 and 9b4 reacted to 4 p166-gst proteins of different hev genotypes and 2 n- or c-terminal truncated p166chn-gst proteins named p146chn-gst and p137chn-gst, but they did not react to 4 p166-his proteins of different hev genotypes and a non-fusion p179chn protein. no detectable signals ab and hev-irrelevant gst fusion proteins, either. conclusion: a novel antigenic epitope recognized by mab 1a8 and 9b4 appears on the gst fusion-expressed and orf2-encoded hev rebinant proteins and it is dependent on the conformational folding of both gst and hev sequences. 　　［keyonoclonal antibody; antigenic epitope 　　体外表达的基因工程重组蛋白能够模拟微生物结构