纸色谱和氨基酸的纸上电泳.pptVIP

实验十九、纸色谱 实验二十、氨基酸的纸 上电泳;一、目的与要求： 1、了解纸色谱的基本原理。 2、学习用纸色谱法分离氨基酸的一般操作。 3、了解电泳的基本原理，学会纸上电泳的操作方法。 4、初步掌握用纸上电泳法分离鉴定氨基酸。 ;二、基本原理 （一）纸色谱是一种分配色谱。滤纸作为载体，纸纤维上吸附的水为固定相，与水不相混溶的有机溶剂作为流动相。 当样品点在滤纸的一端，使流动相从有样品的一端上行，通过毛细管作用，流向另一端时，依靠溶质在两相间的分配系数不同而达到分离。极性大的组分在固定相中分配得多，随流动相移动速度慢，极性小的在流动相中分配得多，随流动相移动速度快一些。 ;三、纸色谱实验步骤（观看录像） 1、点样； 2、展开； 3、显色与结果处理——计算出两个物质的Rf值。; 纸色谱图;（二）在一定的条件下，带电的质点在电场作用下，向着与其所带电荷相反的电极移动，这种现象称为电泳。 不同氨基酸在同一pH值的溶液中，所带的电荷不同。在同一电场中，带不同电荷的各个氨基酸泳动的方向和速度不相同，因此将不同的氨基酸在同溶液中进行电泳时，由于各个氨基酸移动的方向和距离都不相同，从而达到分离鉴定的目的。;四、纸上电泳实验步骤（观看录像） 1、点样与润湿； 2、电泳； 3、显色； 4、结果处理——标明正、负极和氨基 酸。;氨基酸的纸上电泳图谱; 实验注意事项： 1、整个实验都不应用手直接接触滤纸（手汗中有氨基酸）； 2、纸色谱点样点越小越好(点2次即可),纸上电泳点样点越小越好（可重复点4-5次）； 3、点完样后，毛细管应放回原试管中，不可放错； 4、电泳实验中，当全部滤纸都放入电泳槽后才可以通电；; 5、电泳结束应先关电源再把滤纸取出 （电压较高，注意安全）； 6、纸色谱中的显色剂已经加入到展开剂 中，不用另外喷，直接吹干即可显色； 7、纸上电泳实验所喷水合茚三酮不能太多，并且注意茚三酮不可喷到皮肤上。