4、六通进样阀-山西大学化学实验中心.ppt

实验十四 混合维生素E的正相HPLC分析条件的选择 ;; 色谱法早在1903年由俄国植物学家茨维特分离植物色素时采用。 他在研究植物叶的色素成分时，将植物叶子的萃取物倒入填有碳酸钙的直立玻璃管内，然后加入石油醚使其自由流下，结果色素中各组分互相分离形成各种不同颜色的谱带。这种方法因此得名为色谱法。以后此法逐渐应用于无色物质的分离，“色谱”二字虽已失去原来的含义，但仍被人们沿用至今;石油醚;色谱法的特点　; 在色谱法中，将填入玻璃管或不锈钢管内静止不动的一相称为固定相；自上而下运动的一相称为流动相；装有固定相的管子称为色谱柱。当流动相中样品混合物经过固定相时，就会与固定相发生作用，由于各组分在性质和结构上的差异，与固定相相互作用的类型、强弱也有差异，因此在同一推动力的作用下，不同组分在固定相滞留时间长短不同，从而按先后不同的次序从固定相中流出。;液体为流动相的色谱称液相色谱（LC）; 高效液相色谱法是一种以液体为流动相的现代柱色谱分离分析方法。流动相与组分之间有一定亲和力，分离过程的实现是组分、流动相和固定相三者间相互作用的结果，分离不但取决于组分和固定相的性质，还与流动相的性质密切相关。高效液相色谱一般可在室温下进行。由于采用颗粒极细的固定相，柱内压降很大，加上流动相粘度高，必须采用高入口压，以维持一定的流动相线速。高效液相色谱仪主要由贮液瓶、高压输液泵、进样系统、色谱柱、检测系统、数据处理系统组成。;液相色谱流程图;一、贮液瓶 用来保证色谱分离的重现性; 高效液相色谱仪所用的洗脱液和注入系统的样品必须无固体微粒和纤维等，以免堵塞管道、色谱柱和影响泵单向阀的正常工作。因此，需选用不同材料的微孔滤膜过滤。 洗脱液进入高压泵前应脱气。因为如果流动相中所含有的空气不除，流动相通过柱子时其中的气泡受到压力而压缩，流出柱子后到检测器时因常压而将气泡释放出来，造成检测器噪声大，基线不稳，使仪器不能正常工作。这在梯度洗脱时尤其突出。 常用的脱气方法有： 加热法 减压法（抽真空） 惰性气体置换法（吹氦气等） 超声波法 在线脱气;1. 对泵的要求 2. 高压输液泵;1. 对泵的要求;二、高压泵;附图1;三、进样系统;1、对进样系统装置的要求;2、进样方式;3、注射进样装置;4、六通进样阀; 六通进样阀是一种高压进样阀，也是现代色谱仪的一种优良的进样装置。 优点： a. 进样量可变范围大，进样量也较大，分析和制备通用，进样量由固定体积的定量管或者微量注射器控制 b. 重复性好　　一般可达0.5% c. 耐高压　可直接在高压下把样品 送入色谱柱，不需停留 d. 如果装上电动或者气动的驱动装置，可进行自动化进样 缺点： a. 阀的死体积大，容易引起色谱峰展宽 b. 柱效比注射器进样下降约10%，为使阀的高压密封性能好，因此制造工艺要求较高;5、自动进样器;四、色谱柱;1. 填料的特性决定色谱柱的性能;2. 柱填料的类型;;3、色谱柱的填充方法;干法：一般填料粒度大于20μm的可用干法，小于20μm的不宜用干法。这是因为细颗粒间相互聚集的倾向，微小颗粒表面存在着局部电荷，具有很高的表面性。因此，在干燥时倾向聚集，产生宽的颗粒范围，并粘附于管壁，这是一种有害想象，只能用湿法填充 。　 湿法：选择合适的液体(加压介质，又叫分散介质）将填充料制成匀浆液。分为非等比重法和等比重法两种，现在常用非等比重法。 ＜1＞非等比重法： 将填料悬浮在强度与以后分析时所使用的流动相的强度相当接近的溶剂中，从而使柱性能调整和溶剂活化时间大大缩短。则要求操作非常迅速，使颗粒沉降减至最小程度。 ＜2＞等比重法： 一般非极性键合相用四氯化碳和甲醇(9:1)作分散介质，用甲醇或乙醇作加压介质。匀浆法填充柱填充压力要高于实际使用时的最高压力。对于常规柱控制在300－600 kg/cm2，柱内径越细，填充压力越高。;五、检测系统;1、检测器的作用;理想检测器应具备的特点：;2、检测器的性能指标;3、液相色谱中的检测器分两类;1. 紫外吸收检测器 2. 紫外可见光检测器 3. 示差折光检测器 4. 光电二极管阵列检测器 5. 荧光检测器 6. 电化学检测器 7. 化学发光检测器 8. 蒸发光散射检测器;二极管阵列检测器;6、色谱数据处理系统;实验目录;混合维生素E的正相HPLC分析 条件的选择 ;2、实验原理 维生素E(VE)主要有α、β、γ、和δ4种异构体，其中又以α-异构体的生理作用为最强。其天然品为右旋体(d-α)，合成品为消旋