基因工程疫苗GeneticEngineeringVaccine.ppt

第八章 基因工程疫苗Genetic Engineering Vaccine;疫苗;疫苗种类;疫苗的基本成分;疫苗的基本特性;传统疫苗;传统疫苗;基因工程疫苗;二、亚单位疫苗 优点： 安全性好 无热源、变应原、免疫抑制源 与感染产生的免疫应答相区别 研究亚单位疫苗的策略： 确定保护性基因，如鸡传染性支气管炎病毒的S基因；轮状病毒的Vp7和Vp4基因；爱滋病病毒gp120 抗原表达系统： 原核表达系统和真核表达系统;三、基因缺失疫苗（Deletion mutant vaccine ） 定义：将病毒致病基因进行缺失，从而获 得弱毒疫苗 优点：毒力稳定、返祖机率小、免疫力强、 免疫期短。 实例: 伪狂犬病毒TK基因缺失使病毒致弱而 获得。1986年获得美国FDA批准的第一 个基因工程苗。;四、重组活载体疫苗 （一）重组病毒载体 1、重组禽痘病毒(Fowl Poxvirus)载体疫苗: 宿主范围广、滴度高、稳定性好、基因容量大、非必需???因多，已经成功地应用于表达禽流感病毒、新城疫病毒、传染性支气管炎病毒和马立克氏病病毒的保护性抗原基因。;2、腺病毒（Adnovirus）载体疫苗：安全、感染非分裂细胞、增殖滴度高、可在消化道和呼吸道繁殖，并能诱导粘膜免疫，可制成口服制剂预防消化道和呼吸 道感染。 3、疱疹病毒（Herpesvirus）载体疫苗：基因组大 （150kb)、容量大、宿主范围窄，故安全、很多疱疹病毒经粘膜感染，诱导粘膜免疫。 已用于载体研究的病毒有：单纯疱疹病毒、伪狂犬病毒、火鸡疱疹病毒、牛疱疹病毒I型、马疱疹病毒I型、传染性支气管炎等。 ;（二）重组细菌载体 优点：培养方便、外源基因容量大、刺激 细胞免疫力强，因为细菌本身起到佐剂的 作用。 常用的细菌载体：乳酸菌（Lactic acid bacteria),安全级微 生物，包括乳酸杆菌、乳酸球菌和双歧杆菌。 成功实列：表达破伤风毒素片段C、布氏杆菌L7/L12蛋白。;（三）构建重组载体疫苗的原则 1、载体的选择：载体的安全性，一般来自疫苗株；载体的组织适性应与表达的抗原一致；活载体对外源基因的容量。 2、转移载体的构建：有足够长的同源臂序列（800-1000bp)；有一个适当的启动子。 3、外源基因的插入位点的选择：外源基因的插入不应影响病毒或细菌的复制，即非必需基因。为降低毒力，可将外源基因插入到毒力基因。 ;核酸疫苗;核酸疫苗研究现状;核酸疫苗研发的一些问题;T细胞疫苗;树突状细胞疫苗（Dendritic Cell Vaccine）;肿瘤疫苗;免疫佐剂（Immunoadjuvant）;佐剂的种类;其它乳化佐剂剂;3、微生物佐剂 短小杆菌：加热或甲醛灭活能非特异性刺激淋巴细胞样组织增生，加强单核巨噬细胞的吞噬能力，增加IgG和IgM的生成。 卡介苗：巨噬细胞的激活剂，同时还能刺激骨髓多能干细胞分化免疫活性细胞，是一种非特异性的免疫增强剂。 细菌脂多糖（LPS）：LPS可促进B细胞的有丝分裂，促进巨噬细胞分泌细胞因子，如IL-1可调节巨噬细胞表面Ia分子的表达，从而改善抗原的提呈。;4、脂质体和Novasomes 脂质体是人工合成的双分子层的磷脂单层或多层微环体，促进抗原提呈的定向作用，已证明小于5μm 的脂质体微粒能被肠道淋巴细胞结吸收并传递给MФ 。脂质体无毒、无免疫原性。实验结果表明新城疫病毒外膜蛋白-脂质体疫苗明显优于单独外膜蛋白疫苗；Novasomes是一种非磷脂的亲水脂分子，比脂质体稳定，廉价，用于粘膜免疫。;5、中草药类 蜂胶：是一种天然的免疫增强剂。据报道，蜂胶或与抗原同时使用增强免疫功能，增强补体和吞噬细胞的活力，增加白细胞的数量和抗体的滴度，并明显增加凝集素的产生。 皂甙及皂甙提取物Qs21：皂甙是皂甙树的粗提物不能用作佐剂，从皂甙提取的成分Qs21可用作疫苗的佐剂。Qs21作为呼吸道合胞体病毒融合蛋白的佐剂与铝佐剂相比，抗原特异性抗体增加了90倍，细胞毒淋巴细胞的杀伤作用也明显增强。 多糖、糖苷及复方中药：中药多糖可激活T、B、巨噬细胞、NK、CTL、LAK细胞、补体，促进细胞因子的生产，有望开发成为新型疫苗佐剂。用当归多糖作为乙型肝炎基因工程疫苗的佐剂可明显提高抗体水平，明显优于铝佐剂。还有用猪苓多糖和香菇多糖与乙肝疫苗联合使用的报道，收到良好的效果。一些复方中药作为佐剂，如紫术散、当归补血汤等对激活免疫系统有很大作用。中药佐剂安全、有效、可靠、稳定是很有发展前景的佐剂。;6、细胞因子 细胞因子可调节抗体应答与细胞介导免疫应答的相互关系，因此，可直接作为免疫佐剂发挥作用。实验证明细胞因子IL-1、IL-2、IFN-gamma等均可作为佐剂。但是，由于所有细胞因子均表现剂量依赖性毒性，而且作为蛋白质半衰期短、生产成本高，限