实验一细胞形态结构的显微镜观察-大连理工大学精品课程.ppt

实验三 叶绿体的分离与荧光观察;1.实验目的;2.实验原理;2.1 差速离心;2.2 荧光显微镜的使用原理 ;荧光显微镜的使用原理示意图;有些生物体内的物质受激发光照射后，可直接发出荧光，称为自发荧光，如叶绿素的火红色荧光。 有的生物材料本身不发荧光，但它吸收荧光染料后同样也能发出荧光，称为间接荧光，如叶绿体吸附吖啶橙后可发橘红色荧光。 ;使用方法;3.实验材料、用品;Olympus（日本） IX71;4.实验步骤;叶绿体的分离与观察;(1)在普通光镜下观察。光镜下观察叶绿体在表皮细 胞和保卫细胞中的分布； (2)在荧光显微镜下观察叶绿体的直接荧光。 (3)在荧光显微镜下观察叶绿体的间接荧光: 取叶绿 体悬液一滴滴在无荧光载片上,再滴加一滴0.01% 吖啶橙荧光染料, 加盖片后即可在荧光显微镜下 观察。;5.实验结果;菠菜叶手切片观察 在普通光镜下可以看到三种细胞 (1)表皮细胞：为边缘呈锯齿形的鳞片状细胞; (2)保卫细胞：为构成气孔的成对存在的肾形细胞; (3)叶肉细胞：为排列成栅状的长形和椭圆形细胞.叶绿体呈绿色橄榄形,在高倍镜下还可以看到绿色的基粒。 在荧光显微镜下, 叶绿体发出火红色荧光,但其荧光强度要比游离叶绿体弱, 气孔发绿色荧光, 两保卫细胞内的火红色叶绿体则环绕气孔排列成一圈。表皮细胞内的叶绿体数量要比叶肉细胞少。 用吖啶橙染色后, 叶绿体则发出桔红色荧光, 细胞核可发出绿色荧光, 气孔仍为绿色。;光镜下叶肉细胞的叶绿体（ ×1000）;光镜下显示菠菜叶片保卫细胞;光镜下叶肉细胞的叶绿体（ ×400）;荧光镜下叶肉细胞的叶绿体自发荧光（ ×400）;游离叶绿体自发荧光（×1000）;6.注意事项;7. 思考题