高效液相色谱法同时测定甘草中甘草酸、甘草苷、异甘草素的含量的论文.docVIP

　　高效液相色谱法同时测定甘草中甘草酸、甘草苷、异甘草素的含量的论文 作者：陈云华,赵晓霞,王文全,段天璇 【摘要】 目的 建立同时测定甘草中甘草酸、甘草苷和异甘草素含量的方法。方法 采用高效液相色谱法对甘草粉末的67%甲醇提取物进行分析。用c18反相色谱柱,1%磷酸水-乙腈梯度洗脱,对不同色谱峰分别采用248、276、360、370 nm紫外波长检测。结果 甘草酸的回归方程为y＝1×106x＋16 220,r2＝1；甘草苷的回归方程为y＝2×106x＋49 444,r2＝0.999 5；异甘草素的回归方程为y＝1×107x＋4.466 7,r2＝1。甘草酸、甘草苷和异甘草素的加样回收率分别为98.01%、102.63%、98.18%。结论 本方法准确、稳定、可靠,可用于甘草中甘草酸、甘草苷和异甘草素3种成分的同时测定。 【关键词】 甘草；甘草酸；甘草苷；异甘草素；高效液相色谱法；含量测定 abstract：objective to develop a hplc quantitatively test method of glycyrrhizin, liquiritin and isoliquritigenin simultaneously for licorice. methods the 67% methanol extracts of licorice pon, using a gradient elution ixture of 1% h3po4 and acetonitrile. the eluate onitored by uv absorption at 248, 276, 360 and 370 nm. results the linear equation of glycyrrhizin ethod is accurate, stable amd reliable, and can be used to determine the three main chemical contents simultaneously. key ination 在甘草质量研究中,建立稳定可靠的甘草多种成分含量测定非常必要。.甘草酸、甘草苷、异甘草素是甘草中代表性成分,甘草酸是皂苷类代表,甘草苷是黄酮类代表,而异甘草素是一种异黄酮类成分。我们此次在以往工作的基础上[1],完善了甘草含量测定方法,使其同时可以对甘草酸、甘草苷、异甘草素进行含量测定。 　　1 仪器与试药 agilent 1100型高效液相色谱仪(配有g1314a紫外检测器、1315b dad检测器、g1311a四元梯度泵、g1322a在线脱气装置、g1316a柱温箱)；agilent 1100化学工作站；sartorius bs110s 1/万、bp211d 1/(10万)电子分析天平；kl3120d超声清洗机。 甘草glycyrrhiza uralensis fisch. 3年生采自甘肃总寨,1～5年生采自内蒙古杭锦旗,由北京中医药大学王文全教 授鉴定。60 ℃干燥过夜并粉碎。甘草酸、甘草苷、异甘草素对照品(批号分别为060520、061009、060801)由上海康九化工公司提供(供含量测定用)???乙腈为色谱纯；水为市售娃哈哈纯净水；甲醇、甲酸、磷酸、冰醋酸为分析纯。 　　2 方法与结果 　　2.1 检测波长的确定 分别称取甘草酸、甘草苷、异甘草素对照品适量,分别加甲醇配制成每1 ml约含0.1 mg的对照品溶液。以甲醇为空白,在波长190～400 nm范围内扫描,结果甘草酸的最大吸收波长为248 nm和360 nm,甘草苷的最大吸收波长为276 nm,而异甘草素的最大吸收波长为370 nm。 　　2.2 色谱条件 色谱柱：agilent zorbax extend分析柱(4.6 mm×250 mm, 5 μm)；柱温：25 ℃；进行梯度洗脱,流动相a为1%磷酸水溶液,流动相b为乙腈；梯度程序、流速及检测波长变化见表1。进样量为10 μl。表1 流动相梯度条件及检测波长（略） 　　2.3 供试品溶液的制备 精密称取甘草粉末(过60目筛,60 ℃干燥12 h)0.1 g,置25 ml容量瓶中,加入20 ml 67%甲醇冷浸24 h,超声30 min,放至室温,加67%甲醇至刻度,摇匀,以0.45 μm微孔滤膜滤过,取续滤液即得。 　　2.4 工作曲线 称取甘草苷对照品6.28 mg、甘草酸对照品5.99 mg,分别用甲醇定容于25 ml容量瓶中,作为甘草苷和甘草酸对照品储备液。另取异甘草素对照品4.35 mg,置25 ml容量瓶中,以甲醇溶解并稀释至刻度,再精密吸取0.4 ml置10 ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,即得异甘草素储备液。分