高效液相色谱法测定地黄寡糖中水苏糖含量的论文.docVIP

　　高效液相色谱法测定地黄寡糖中水苏糖含量的论文 作者：安阳，杨菁，岳春丽，刘影 【摘要】 目的建立高效液相色谱法测定地黄寡糖中水苏糖含量方法。 方法采用菲罗门rezex rpm-monosaccharide pb+ +8%（7.8mm×300mm）色谱柱，以水为流动相，流速0.8 ml/min，示差检测器测定地黄寡糖中水苏糖含量。结果在该色谱条件下，水苏糖在0.20～3.20 mg/ml范围内峰面积和进样质量有良好的线性关系，其相关系数为0.999 5。样品平均回收率为99.9%，rsd为1.2%（n=6）。结论该方法灵敏可靠，专属性强，且具有快速、简便、重复性好的特点。 【关键词】 地黄寡糖； 水苏糖； 高效液相色谱 　　abstract：objectiveto establish an hplc method for determination of stachyose contents in rehmannia glutinosa oligosaccharides(ros).methodsstachyose ined -monosaccharide pb+ +8%（7.8 mm×300 mm）column, obile phase and differential refractive index detector. resultsthe correlation coefficient betple average recovery ethod is simple, rapid, specific, accurate and reproducible. 　　key annia glutinosa oligosaccharides (ros); stachyose; hplc 地黄首载于《神农本草经》，为玄科多年生草本植物（rehmannia glutinose libosch）的根。.地黄常被作为益智药物使用。地黄饮子治疗血管性痴呆39例，总有效率可达66.67%［1］。地黄饮子证明对中风患者的神经功能恢复具有良好的治疗效果［2］。熟地黄水煎剂可以改善alcl3导致痴呆小鼠和大鼠的学习记忆功能［3］。尽管地黄的药理作用得到人们认可，但地黄发挥作用的具体成分并不清楚。由于以上地黄制剂在使用时均为其水溶性成分，因此，推断其发挥作用的应为水溶性成分。在此推论的基础上制备了地黄寡糖［4］(rehmannia glutinosa oligosaccharides，ros)，研究表明，ros对缺血再灌导致的大鼠学习记忆损伤具有保护作用［4］；对谷氨酸诱导的神经细胞损伤具有保护作用［5］。为进一步探讨ros发挥药理学作用的物质基础，对ros中的水苏糖含量进行了测定。 　　1 仪器与试剂 日本岛津液相色谱仪一套，包括lc-20atvp色谱泵、rid-10a示差检测器、柱温箱、lcsolution 1.03色谱工作站；kq-250b超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司生产；sys-550型石英亚沸高纯水蒸馏器，由金坛市丹阳门石英玻璃厂生产；水苏糖对照品，购于北京慧德易科技有限责任公司，纯度99.8%。ros，自制，批号200803022008030420080402。 　　2 方法与结果 　　2.1 溶液的制备 　　2.1.1 对照品溶液的制备精密称取水苏糖对照品适量，加水制成每毫升含1.0 mg的溶液，即得。 　　2.1.2 供试品溶液的制备即自制ros，稀释10倍，用0.45 μm的膜滤过，作为供试品溶液。 　　2.2 色谱条件 　　色谱柱：菲罗门rezex rpm-monosaccharide pb+ +8%（7.8 mm×300 mm）；流动相：水；流速：0.8 ml/min；柱温：80℃，示差检测器，进样量：10 μl。结果表明供试品溶液在水苏糖位置上有相应的峰存在，且与其它色谱峰可以基线分离。表明水苏糖在此色谱条件下分离良好。理论塔板数按水苏糖计，应不低于3 000。色谱图见图1。 　　2.3 线性关系实验 　　分别精密称取水苏糖对照品，加水配制浓度分别为0.20，0.40，0.80，1.60，3.2 mg/ml的溶液，按色谱条件分别进样10 μl，测得峰面积，以对照品浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，得线性回归方程为：y=100 409x-3 340.9，r=0.999 5。结果表明水苏糖在0.20～3.20 mg/ml时，浓度与峰面积呈良好线性关系。 　　2.4 精密度和稳定性实验取同一供试品溶液，按上述色谱条件，重复进??6次，10 μl/次，测定水苏糖峰面积，其rsd为1.2％，表明此法的精密度良好。 　　取同一供试品溶液，并分别于0，3，