高效液相色谱法测定大鼠海马中5.docVIP

　　高效液相色谱法测定大鼠海马中5 作者：朱玲英，孔铭，彭蕴茹，王佩娟 【摘要】 目的建立了高效液相荧光色谱测定大鼠海马中5-羟色胺（5-ht）含量的检测方法。方法采用alltima c18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm)，流动相为0.1 mol/l磷酸二氢钾溶液甲醇(9∶1,v/v)，等度洗脱，流速1.0 ml/min。激发波长（λex）254 nm，发射波长（λem）338 nm。结果线性范围为0.70～8.40 ng(r=0.999 9)；当信噪比为3（s/n =3）时，检出限为1.27×10-3 ng；日内测得精密度相对标准偏差(rsd)为0.7%；重复性测定相对标准偏差(rsd)为2.8%；加样回收率为88.6%～101.5%。结论该方法简便、准确、灵敏，特异性强，重复性好，适用于海马中5-ht的含量测定。 【关键词】 5-羟色胺； 高效液相色谱； 荧光检测； 大鼠海马 　　 　　abstract：objectivethe content of 5-ht in hippocampus of rat ined by high performance liquid chromatograph-fluorescence (hplc-flu). methodsthe separation and determination a c18 column (250 mm× 4.6 mm,5 μm), 0.1mol·l-1 kh2po4 -methanol(9:1,v/v) as mobile phase , flol·min-1. the fluorescence excitation and emission ) 338 nm, respectively. resultsthe linear range of the method it of 5-ht ethod is simple, sensitive, reliable and has strong specificity and good repetition .it is suitable for the content determination of 5-ht in hippocampus of rat, by high performance liquid chromatography. 　　key ine (5-ht)； high performance liquid chromatography； fluorescence detection； hippocampus of rat 　　5-羟色胺（5-ht）是人体内一种重要的生物活性物质，参与脑缺血、镇痛、学习、记忆等多种生理过程，该物质广泛存在于脊椎动物脑内，在外周神经和其它组织中含量很低，对机体正常生理功能起着重要的调节作用［1～3］。.因此定量测定5-ht含量对神经精神疾病、遗传性疾病、脑血管病以及发病机制的研究具有重要的价值。文献报道测定5-ht含量方法有比色法、荧光法、免疫法、高效液相-电化学色谱法（hplc-ecd）、高效液相-荧光色谱法（hplc-fld）［4］。本实验采用hplc-fld对大鼠脑匀浆样品液直接进行5-ht含量的测定，通过对色谱条件的优化，建立了稳定、快速、灵敏的含量测定方法并用于大鼠海马中该类物质的测定，为疾病的发病机理研究提供依据。 　　1 仪器和试剂 　　美国poettler万分之一、十万分之一及百万分之一电子天平；美国milli-q纯水器；三洋mdf-382e超低温冰箱，beckman 21r高速冷冻离心机，上海金达生化仪器厂xuf-1高速分散器。 　　5-羟色胺（5-ht）标准品（1357359美国fluka公司）；甲醇为江苏汉邦科技有限公司的色谱纯甲醇；其它试剂均为分析纯。 　　2 方法 　　2.1 色谱条件色谱柱为alltima c18(4.6 mm×250 mm,5 μm)，流动相为0.1 mol/l磷酸二氢钾溶液-甲醇（9∶1 v/v）；单泵等度洗脱；流速1.0 ml/min，；λex:254 nm；λem:338 nm；柱温：35℃。 　　2.2 标准品溶液的配制精密称取5-ht标准品适量，用0.1 mol/l盐酸制成0.35 mg/ml的对照品贮备液,避光冷藏保存。按实际检测需要，用0.1 mol/l盐酸溶液稀释到相应的溶度，供检测用。 　　2.3 大鼠海马脑组织匀浆样品的制备取大鼠海马组织，称湿重，以1∶10的比例加入0.4 mol/l的高氯酸，(即每100 mg脑组织加1 ml 0.4 mol/l的高氯酸)。冰浴下充分匀浆，冰浴沉淀30 min，于4℃，10 000 r·min-1离心15min，取上