高效液相色谱法测定楤木及其提取物中齐墩果酸的含量的论文.docVIP

　　高效液相色谱法测定楤木及其提取物中齐墩果酸的含量的论文 作者：田吉，李翅翔，何兵，肖顺汉 【摘要】 　　目的建立楤木及其提取物中齐墩果酸的含量测定方法。方法采用 高效液相色谱（hplc）法，色谱柱为kromasil c18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相为甲醇-水（95∶5），检测波长210 nm，柱温30℃；流速1.0 ml·min-1；进样量10μl。结果齐墩果酸在0.502～4.016μg 范围内与峰面积具有良好的线性关系（r＝0.999 9），平均回收率96.38 %，rsd为1.17%。结论该方法灵敏、准确，可用于楤木及其提取物的质量控制。 【关键词】 楤木； 提取物； 齐墩果酸； 含量测定； 高效液相色谱法 　　abstract：objectiveto establish a method for the determination of oleanolic acid in root bark of aralia and its extracts．methodsa kromasil c18 column(250mm×4.6mm，5μm) obile phase consisting of methanol-. the column temperature l·min-1，and the sample volume ethod is sensitive，accurate，and is suitable for the quality control of root bark of aralia and its extracts． 　　key ination； hplc 　　楤木，又称楤木白皮，为五加科楤木属植物楤木aralia chinensis l.的根皮，具有祛风湿，利小便，散淤血，消肿毒的功效［1］。.全国各地以多种楤木属植物的根皮作楤木入药，常见的有楤木、太白楤木、辽东楤木、黄毛楤木等种。楤木属植物的主要有效成分为楤木皂苷，苷元为齐墩果酸。楤木皂苷具有适应原样作用，以及中枢神经抑制、强心、降血脂、降血糖和降血压、抗癌等多种药理作用［2，3］。但目前国家尚无楤木皂苷的法定对照品，为控制质量，本实验采用高效液相色谱法，以苷元齐墩果酸为指标，测定了楤木药材及其提取物楤木总皂苷的含量。 　　1 仪器与试药 　　1.1 仪器 　　戴安高效液相色谱仪（p680a四元低压梯度泵，pda-100二极管阵列检测器，tcc-100柱温箱，chromeleon色谱工作站）；瑞士precisa电子天平（xr 205sm-dr）。 　　1.2 试药 　　辽东楤木，购至安徽亳州药材市场，产地辽宁，楤木，采至四川省泸州市纳溪区龙车乡，经泸州医学院生药教研室鉴定分别为辽东楤木aralia elata (miq.)的及楤木aralia chinensis l.的根皮。楤木总皂苷，由泸州医学院药物研究所自制。齐墩果酸对照品（110781-200512），中国药品生物制品检定所提供，经hplc峰面积归一化法计算纯度在98％以上。甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其他试剂均为分析纯。 　　2 方法与结果 　　2.1 色谱条件 　　色谱柱为dikma kromasil c18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为甲醇-水（95∶5）；检测波长为210 nm；柱温为30℃；流速为1.0 ml·min-1；进样量10 μl。 　　2.2 对照品溶液的制备 　　精密称取齐墩果酸对照品5 mg，加甲醇25 ml制成0.2 mg·ml-1的对照品溶液（实际0.200 8 mg·ml-1）。 　　2.3 供试品溶液的制备 　　2.3.1 楤木药材供试品溶液的制备 　　精密称取药材细粉0.2 g，加入25 ml甲醇，回流提取4 h，过滤，少量甲醇洗涤，合并滤液，水浴挥去甲醇，加20 ml10%稀硫酸，水浴回流4 h，氯仿60 ml分5次萃取，合并萃取液，10 ml水洗后水浴蒸干，加甲醇溶解并定容到10 ml。 　　2.3.2 楤木提取物供试品溶液的制备 　　精密称取总皂苷0.2 g，加入20 ml 10%稀硫酸，水浴回流4 h，氯仿60 ml分5次萃取，合并萃取液，水浴蒸干，加入甲醇定容到25 ml，精密量取1 ml，用甲醇定容至10 ml。 　　2.4　系统适应性实验分别精密吸取上述对照品溶液、供试品溶液各10 μl，注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件测定，记录色谱图，结果见图1～4。在试验条件下，齐墩果酸与其相邻色谱峰的分离度大于1.5，理论塔板数以齐墩果酸峰计均大于10 000，溶剂无干扰。 　　2.5 线性关系考察 　　精密吸取齐墩果酸对照品溶液 (0.200 8 mg·ml-1) 2.5，5，7.5，10，15，