高效液相色谱法测定清肝胶囊中龙胆苦苷的实验研究的论文.docVIP

　　高效液相色谱法测定清肝胶囊中龙胆苦苷的实验研究的论文 【摘要】目的建立高效液相色谱法测定清肝胶囊中的龙胆苦苷方法以c18反相柱为色谱柱，甲醇—水为流动相。检测波长270nm，用乙酸乙酯和甲醇混合液作提取剂。结果平均回收率为98.38%。r=0.9995,线性关系良好。结论此方法灵敏、准确，适用于龙胆苦苷的测定。 【关键词】高效液相色谱法清肝胶囊龙胆苦苷 龙胆为龙胆科植物，其根及根茎含龙胆苦苷，龙胆苦苷具有清肝解毒、消食健胃的功效。用高效液相色谱法（hplc）测定复方制剂中的龙胆苦苷，其操作步骤简便，样品回收率高，重现性好，结果可靠，现报道如下。 1仪器与试药 1.1仪器 　　紫外分光光度计（日本岛津uv-260）；高效液相色谱仪（ag）；薄层层析点样台tlc-sp-1（西安市秦西机械厂）；离心机800型（江苏医用设备仪器厂）；微量进样器（上海医用激光仪器厂）。. 1.2试药 　　中性氧化铝（100～200目）（上海五四试剂厂）；硅胶gf254（青岛海洋化工厂）；龙胆苦苷对照品（ 3.1.3提取溶剂的选择：龙胆苦苷为裂环环烯醚萜单糖苷，极性大。清肝胶囊为复方制剂，成分复杂，提取溶剂的选择会影响下一步的薄层分离。因此，试用了甲醇、丙酮、乙酸乙酯等溶剂提取找出最佳提取溶剂。试验表明，甲醇对龙胆苦苷的提取效率高，同时出提出大量糖类水溶性杂质，影响薄层分离，干扰紫外吸收。而乙酸乙酯虽提取效率较差，但提取的糖类等杂质也较少。因此，采用乙酸乙酯—甲醇（70：10）的比例混合作提取溶媒；既能定量地提取龙胆苦苷，又能尽可能少地提出杂质，在该溶媒条件下的最大吸收波长为270nm。 3.2回收率试验 取清肝胶囊样品5份，精密称量，分别加入一定量的龙胆苦苷对照品，照含量测定项下的方法分别测定含量， 计算 回收率。 3.3精密度实验 3.3.1样品测定精密度实验取清肝胶囊样品6份，每份5g，照含量测定项下的方法试验，分别测定含量。 3.3.2薄层层析精密度试验取清肝胶囊样品5g，照含量测定项下的方法试验，在6块薄层板上点样［２］，每块板上点2个点，测定含量。 3.4紫外光谱试验 　　取清肝胶囊与空白龙胆制剂各5g，分别照含量测定项下的方法制备供试品溶液，照分光光度法试验，在200～350nm间进行重叠扫描。结果表明，在270nm处，制剂中其它原料几乎不影响龙胆苦苷的测定。 3.5标准曲线的制备 　　取龙胆苦苷对照品约400mg，照含量测定项下的方法绘制标准曲线。回归方程为conc=17﹒856a-0.0275，r=0.9995，曲线通过原点，线性相关较好。 4讨论 　　采用高效液相色谱法测定清肝胶囊中的龙胆苦苷的含量，样品的预处理是关键。在工艺上采用连续回流提取方法提取龙胆苦苷［３］，至提取液近无色时，可提尽龙胆苦苷。其残渣经薄层层析检验，无龙胆苦苷斑点。提取液浓缩后加入水，龙胆苦苷转溶于水中，过滤，可除去提取中带来的脂溶性杂质；水溶液经氧化铝层析柱，甲醇洗脱，大部分色素等杂质被吸附［４］，而龙胆苦苷被洗脱下来。柱层析洗脱过程中，采用100ml甲醇洗脱，龙胆苦苷几乎全部洗下来。 　　采用薄层层析方法，用硅胶gf254板分离，荧光熄灭法定位，龙胆苦苷斑点清晰，有利于刮板。 　　通过试验证实，采用高效液相色谱法测定清肝胶囊中的龙胆苦苷，方法准确、稳定、可靠。 参??? 文献  ［１］卫生部药政局，