HPLC法测定红曲霉发酵液中洛伐他汀含量.docVIP

　　HPLC法测定红曲霉发酵液中洛伐他汀含量 【摘要】 目的 建立测定红曲霉发酵液中洛伐他汀含量的 方法 。方法 采用HPLC法，以甲醇作溶剂、摇床振荡（150 r/min）3 h提取洛伐他汀，色谱条件：以甲醇18 mmol/L磷酸溶液（体积比为80∶20）为流动相，流速为1.0 mL/min，检测波长为237 nm。结果 洛伐他汀在5～50 μg/ mL质量浓度范围内与峰面积线性关系良好，加样平均回收率为100.75%，RSD为0.87%。结论 本方法简便有效，重复性好，可作为红曲霉相关产品的质量控制方法。 【关键词】 高效液相色谱法；红曲霉；洛伐他汀 　　Abstract:Objective To establish an HPLC method for determining the content of lovastatin in fermentation broth of Monascus. Method Lovastatin could be pletely extracted from the fermentation broth by methanol under shaking for 3 h in. The n, samples n using methanol18 mmol/L phasphate(80∶20) as mobile phase under the floL/min. The detection . Result The method had good linearity over the concentration of 5～50 μg/mL for lovastatin. The average recovery ethod is convenient, effective and accurate, poo R低温高速离心机（德国Sorvall公司），SHZ-82气浴恒温振荡器（江苏省金坛市宏华仪器厂），十万分之一 电子 天平（日本岛津）。 　　1.2 试剂与试药 　　洛伐他汀对照品（批号100600-200502， 中国 药品生物制品检定所），95%乙醇（ 分析 纯，广州化学试剂厂），甲醇（分析纯，广州化学试剂厂），甲醇（色谱纯，英国TEDIA公司）。 　　1.3 菌株 　　安卡红曲霉（Monascus anka）CICC5031，由中国 工业 微生物菌种保藏中心保存。 　 　2 菌株的培养 　　将菌株接种在含有马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）4.01%的平板培养基上培养5 d，以活化菌株，然后接种于含有质量分数分别为葡萄糖10%，牛肉浸膏0.5%，（NH4）2SO4 2.5%，番茄酱5%， CaCO3 1%， MgSO4·7H2O 1%，pH6.5的摇瓶培养基，30 ℃、150 r/min振荡培养。 　　 3 方法 与结果 　　3.1 色谱条件 色谱柱为Dikma Diamonsil C18(4.6 mm×250 mm；5 μm)；柱温30 ℃；检测波长237 nm；进样体积10 μL，甲醇18 mmol/L磷酸（体积比80∶20）为流动相，流速为1.0 mL/min。在该条件下，对照品与样品的色谱图见图1。 　　3.2 标准曲线的绘制 　　样品溶液的制备：取摇瓶培养10 d的发酵液2 mL,研磨后加入8 mL无水甲醇，150 r/min振荡3 h，5 000 r/min离心10 min后取上清，经0.22 μm滤膜过滤后得到样品溶液。 　　 　　对照品溶液的制备：准确称取洛伐他汀对照品10.0 mg，用无水甲醇定容至100 mL，经0.22 μm滤膜过滤后得到100 μg/mL对照品溶液。 　　 　　取上述对照品溶液稀释得到5，10，20，30，40，50 μg/mL的系列溶液，按照所述色谱条件进样，以峰面积（A）对质量浓度（ρ）进行线性回归,回归方程为A=44813ρ-1330.6，R2=1.0000,洛伐他汀在5～50 μg/mL范围内线性关系良好。 　　3.3 精密度试验 　　 　　取50 μg/mL对照品溶液，按上述液相色谱条件，进样测定 5次，结果峰面积的RSD值为0.56%，表明方法精密度良好。 　　3.4 重复性试验 　　 　　取同批样品溶液5份，按“3．2”项方法制备，进样测定，结果洛伐他汀平均含量的RSD值为0.82%，表明方法重复性好。 　　3.5 稳定性试验 　　取重复性试验中同一浓度样品溶液室温下放置，于第0、2、4、8、12 h依次测定洛伐他汀含量，结果其RSD值为0.67%，表明样品溶液在12 h内测定结果稳定。 　　3.6 回收率试验 　　 　　精密量取1 mL样品溶液，置25 mL容量瓶中，