两种X染色质标本制备方法的比较.docVIP

　　两种X染色质标本制备方法的比较 【摘要】 目的 对比两种X染色质标本制备 方法 ，选出优势方法。方法 选择两个层次的学生作为样本，同时采用两种方法制片，比较实验结果的优劣。结果 滴片法实验成功率及X染色质阳性率明显高于涂片法(Plt;0.01或0.05)。结论 滴片法与涂片法相比具有显著优越性。 【关键词】 性染色质；染料；细胞学技术 　　伴随着医疗水平、医疗技术的进步，过去严重危害人类健康的一些传染性疾病得到了有效的控制，发病率在逐年降低，遗传性疾病在各年龄的疾病谱中占据着越来越重要的位置。医学遗传学作为 研究 这类疾病发生 发展 机理的学科，在各大医学院校中的地位也正逐步提高。我校20世纪80年代始开设的医学遗传学课程，直到20世纪90年代末一直只安排了六节实验课；进入21世纪后，虽然经扩招学生数目增加了，教学资源更加紧张，但却大幅度提高了实验课时，基本上增加了一倍。在这种情况下，我们又补充了一些 内容 ，X染色质的制备就是其中之一。 　　1 原理 　　正常雌性哺乳动物体细胞内两条X染色体中有一条基本处于失活状态，在间期细胞核内固缩形成一种深染的块状结构。这一结构在口腔、阴道等部位的粘膜上皮中通过简单的染色方法就可以观察到。通过进一步 计算 X染色质阳性率，不仅可以在胚胎期较为准确的判断胎儿性别；当临床上怀疑有X染色体数目异常时，也可以作为辅助诊断方法，对于没有条件开展染色体检查的地区不失为一种 经济 实用的方案。正是在此基础上，我们增加了X染色质标本制备的实验。 　　2 方法与步骤 　　X染色质制备方法大致分两大类，涂片法和滴片法，操作步骤分别如下： 　　2.1 涂片法［1］ 　　2.1.1 取材制片 受检者漱口后，用牙签刮取口腔粘膜上皮细胞，均匀涂在干净的载玻片上。 　　2.1.2 固定 将载玻片置于新配制的3∶1甲醇-冰醋酸固定液中，10min后取出。 　　2.1.3 水解 玻片标本置于5m HCl中，水解15min。充分冲洗，除去多余的盐酸。 　　2.1.4 染色 置Giemsa染液中染色10min或0.2%甲苯胺蓝染液染色5～10min，细水流冲洗晾干，镜检。 　　2.2 滴片法［2］ 　　2.2.1 取材 所刮取细胞涮于装有生理盐水的离心管中，离心1000r/min，10min。 　　2.2.2 低渗 弃去上清液，加5ml低渗液混匀，37℃低渗6min，离心。 　　2.2.3 固定 弃去上清夜，加3∶1甲醇-冰醋酸固定液，室温固定10min，离心。 　　2.2.4 滴片 弃上清，混匀后制成细胞悬液，滴1滴于玻片上，迅速对准液滴吹气。 　　2.2.5 水解，染色同上。 　　3 两种实验 方法 的比较 　　选择本学期开课的05级临床专升本（150人）及04级临床本硕七年制班（60人）作为实验对象，男女搭配随机分组（由女生刮取口腔上皮），每组同学分别采用上述两种方法，每一方法制作两张临时装片，共计4张，并对结果予以比较，结果见表1。 　　表1 不同制备方法的比较（略） 　　注：两组层次的学生均使用过显微镜，具备显微镜的基本知识和基本技能。与滴片法比较，a：χ2=64.62，b：χ2=199.12，d：χ2=10.86，P均lt;0.01，c：χ2=5.56，Plt;0.05(X染色质阳性率为平均计数1007细胞中，几个细胞可见X染色质) 　　4 讨论 　　滴片法较涂片法更为优越，有以下几方面的原因：①取材：涂片法在刮取口腔粘膜细胞后直接涂片，实验结果受个体操作技术 影响 很大。（在本实验选择的两个样本中，04本硕与05专升本的学生相比，动手机会更多，实验技能更娴熟，因此成功率略高。）一张载玻片方寸大小，涂片次数有限，镜检细胞数目过少，是一重要的制约因素。滴片法恰恰可以解除上述因素影响，取材时可以多刮取几次，经生理盐水冲洗后统一盛放于离心管；由于来源增加，离心沉淀后获取细胞数目大大增加。②低渗：涂片法不进行此步操作，滴片法中增加了这一步骤。低渗处理后，细胞核膜膨胀，X小体体积增大，便于观察计数，增加了X染色质检出率。这一点对于没有经验的学生来说很有帮助。但在低渗过程中应注意把握时间，过短不利于核膜膨胀，过长易造成细胞破裂、核膜破碎。③滴片：在运用涂片法时，尽管一再强调涂片时注意方向性，避免重复或来回涂片，但是镜下观察到的细胞分布不均匀的现象仍然十分普遍，重叠细胞较多，是影响观察的重要因素之一。滴片法中改为吸取细胞悬液进行滴片，滴片后朝一个方向吹气（或吹风机朝一个方向吹风）帮助细胞分散，镜检细胞分布均匀，重叠现象不再出现，利于辨认识别。在此实验的基础上，我们作了一个小小的改进：将数次离心的转速由原来的1000r/min提高至3000r/min，时间则相应缩短为3min。实践证明，实验