何首乌饮对雌性衰老大鼠下丘脑神经递质的影响.docVIP

　　何首乌饮对雌性衰老大鼠下丘脑神经递质的影响 作者：李亚丽，张娜，庞晓静，高福禄，王方娜，齐晅，陈雪 【摘要】 目的探讨下丘脑衰老时神经递质的变化及何首乌饮延缓下丘脑衰老的作用机制。方法D-半乳糖连续腹腔注射致亚急性衰老动物模型，造模后灌胃何首乌饮连续60 d后，大鼠断头取下丘脑。采用ELISA法检测各组大鼠SP，β-EP和GnRH的含量；高效液相色谱法（HPLC）以SHIMADZU-10A 高效液相色谱仪和L-ECD-6A电化学检测器检测下丘脑单胺类神经递质NA，DA，5-HT的含量。结果同正常对照组相比，模型组大鼠下丘脑GnRH、SP明显增高，β-EP与NA、DA、5-HT含量明显降低，差异有统计学意义（Plt;0.05）。与模型组比较，何首乌饮组下丘脑GnRH、SP明显下降，β-EP与NA、DA、5-HT含量显著升高，呈现一定的剂量依赖性。结论 衰老时大鼠下丘脑正常功能被破坏，何首乌饮通过对神经递质紊乱的调节而延缓了下丘脑的衰老。 【关键词】 何首乌饮； 下丘脑； 神经递质 　　Abstract：ObjectiveTo investigate the changes of hypothalamus brain neurotransmitter of aging rats and mechanisms of Heshouus aging.MethodsThe sub-acutely aging model inistered once daily for 60 days after aging induction.The rats putated by head and the hypothalamus ethod of ELISA to detect SP, β-EP and GnRH. The concentration of monamine transmitters including noradrenaline (NA), dopamine pared al group (Plt;0.05). HSSF），冰浴下将组织研磨成浆后4℃离心取上清。分别用双抗夹心ELISA法检测GnRH、SP、β-EP（GnRH、SP、β-EP试剂购自R＆B公司）。 　　2.2 下丘脑单胺类神经递质含量的测定 　　2.2.1 对照品溶液的配制精确称取对照品去甲肾上腺素 　　（noradrenaline, NA）、多巴胺（dopamine, DA）、5-羟色胺（5-hydroxytrypatmien, 5-HT），配成浓度分别为30，15，10 ng/μl的标准混合溶液500 ml。（NA、DA、5-HT试剂购自FLUCA公司）。 　　2.2.2 样品制备取下丘脑，称重后置于400 μl 0.1 mol/L高氯酸溶液中，冰浴下用内切式匀浆器匀浆，4℃离心40 min，取上清液10 μl进样。 　　2.2.3 色谱条件流动相：乙酸钠缓冲液-甲醇（96∶4），过饱和柠檬酸调pH=4.9；流速：1.2 ml/min；色谱柱：Discovery C18 (250 mm×4.6 mm)5 μm；柱温：室温。 　　精密量取上述对照品混合溶液各0.1，1，3，6 ml，分别置于10 ml容量瓶中，双蒸水稀释至刻度，得到一系列浓度的标准品混合溶液，分别取10 μl进样，记录峰面积积分值。以浓度为横坐标，峰面积积分值为从纵坐标作标准曲线，并进行回归 计算 ，所得回归方程分别为：NA：Y=69.319 6+70 146.292 7X，r=0.999 9；DA：Y=3 557.920 3+7 771 405X，r=0.999 8；5-HT：Y=-9 252.252 8+168 666.729 5X，r=0.999 9。 说明NA在0.290～28.96 ng/μl范围内、DA在0.16～28.96 ng/μl范围内、5-HT在0.102～10.20 ng/μl范围内线性关系良好。 　　2.2.4 精密度测定取对照品混合溶液10 μl进样，重复进样5次，分别记录色谱峰面积积分值，计算RSD为1.02%，说明仪器精密度和操作精密度较好。 　　2.2.5 溶液稳定性检测将对照品混合溶液在0，1，3，5，7 h分别进样，进样量为10 μl，分别记录色谱峰面积积分值，计算RSD为2.31%，说明在7 h之内对照品混合溶液基本稳定。 　　2.2.6 回收率测定在4组下丘脑组织匀浆上清液中以一组为空白组，另三组分别加1，2，3 ng的NA、DA、5-HT标准混合液，10 μl进样。测得值分别减去空白组测得值，然后分别除以1，2，3，得回收百分率。各组n=5，结果见表1。结果表明上述含量测定方法回收率良好。 　　2.3 统计学分析所有数据均以±s表示，