出血性脑梗死大鼠脑损伤机制及三磷酸腺苷敏感性钾通道的作用.docVIP

　　出血性脑梗死大鼠脑损伤机制及三磷酸腺苷敏感性钾通道的作用 【摘要】 目的: 验证KATP通道是否参与出血性脑梗死的病理过程，探讨HI继发脑损伤的机制. 方法 : 健康雄性SpragueDaorrhagic infarction, HI）组、单纯脑梗死（cerebral infarction,CI）组、格列苯脲（Glibenclamide,Gli）干预(Gli+HI,GH)组和假手术(Sham)组. 应用 两步法建立HI大鼠模型. 术后3,6,12,24 h进行神经功能评分、脑组织含水量及脑组织三磷酸腺苷酶（adenosine triphosphatase, ATPase）,琥珀酸脱氢酶（succinic dehydrogenase,SDH）,丙二醛（malondialdehyde,MDA）测定. 结果： HI组和CI组大鼠术后各时间点神经功能评分、脑组织含水量差别无统计学意义(Pgt;0.05). HI组大鼠脑组织ATPase活性术后12,24 h高于CI组(Plt;0.05), SDH活性术后24 h高于CI组(Plt;0.05)，MDA含量术后12 h低于CI组(Plt;0.05)；以上现象均可被Gli取消. 结论： 应用两步法制作的HI大鼠模型较为稳定、可行. CI后继发中等量出血后早期，脑组织对缺血缺氧耐受性增强，延缓了脑损伤，与KATP通道开放有关. 【关键词】 脑出血 脑梗死 疾病 模型 动物 三磷酸腺苷敏感性钾通道 腺苷三磷酸酶 琥珀酸脱氢酶 丙二醛 0引言 脑血管病是导致人类死亡的三大疾病之一，以缺血性脑血管病最常见，约占全部脑血管病的80%，病死率和致残率均高. 早期溶栓是急性期脑梗死(cerebral infarction,CI)有效的 治疗 方法，部分患者在溶栓治疗后继发脑出血，形成出血性脑梗死(hemorrhagic infarction,HI)，病理过程较为复杂. 我们应用两步法建立HI大鼠模型，对HI和CI早期神经功能缺损、脑水肿及脑组织三磷酸腺苷酶(adenosine triphosphatase, ATPase),琥珀酸脱氢酶(succinic dehydrogenase, SDH)和丙二醛(malondialdehyde, MDA)进行对比 研究 ，并应用三磷酸腺苷敏感性钾通道(adenosine triphosphate sensitive potassium channels,KATP通道)抑制剂格列苯脲(Glibenclamide,Gli)进行干预，验证KATP通道是否参与HI的病理过程，对HI的病理机制进行初步探讨. 1材料和方法 1.1材料立体定向仪（SR6N, Japan）；ANDHR120 电子 天平（日本，精确度为0.1 mg）；恒温干燥箱（北京市朝阳区来广营医疗器械厂）；3034A型隔水式培养箱（南通 科学 仪器厂）； -80℃冰箱（日本）；玻璃匀浆器；721分光光度计；手术相关器械；自制行为学评分器械；三磷酸腺苷酶测试盒、琥珀酸脱氢酶测试盒及考马斯亮蓝蛋白测定试剂盒（南京建成生物工程研究所）；格列苯脲（Sigma）;液氮及各种实验室常用试剂. 1.2方法 1.2.1实验动物与分组成年健康雄性SpragueDa)组. 每组按时间分为术后3，6，12，24 h共4个亚组，每个亚组6只大鼠. 1.2.2动物模型的建立应用本实验室的两步法制作HI大鼠模型：大鼠称质量后麻醉. 第一步，参照Longa等［1］和Laing等［2］的线栓法制作大鼠右侧大脑中动脉闭塞（middle cerebral occlusion，MCAO）模型. ① 大鼠仰卧位固定于手术台，取颈部正中切口约3 cm. 暴露右侧颈总动脉（mon carotid artery，CCA）,颈外动脉（external carotid artery，ECA）和颈内动脉（internal carotid artery，ICA）. ② 结扎、离断ECA的分支，在距CCA分叉3～4 mm处结扎并离断ECA. ③ 在ECA残端剪一0.2 mm的小口，将制备好的线栓（直径0.235 mm，头端呈球形）插入，并沿ICA插入颅内，进线长度距CCA分叉处(18.5±0.5) mm，进线有轻微阻力感时停止. 结扎、剪断线栓尾端部分，常规逐层缝合切口. 第二步，参照Hua等［3］及本实验室改良的方法［4］，将50 μL自体尾动脉血注入尾状核部位. ① MCAO造模成功后，随即将大鼠固定于立体定向仪，暴露Bregma点. ② 取Bregma点右侧中线旁3 mm,向前1 mm，用牙科钻钻一直径1 mm的圆孔，深度达硬脑膜. ③ 将大鼠双下肢翻转朝上固定，在尾根部腹侧面作一约2～3 cm的纵形切口，暴露尾动脉. 用生理