原发性高血压病不同证型PPARγ基因表达与颈动脉血管重构的关系.docVIP

　　原发性高血压病不同证型PPARγ基因表达与颈动脉血管重构的关系 作者：孟云辉， 田丽芬，于慧卿， 刘真， 李武卫 【摘要】 目的探讨原发性高血压（EH）证型与外周血淋巴细胞过氧化物酶体增殖物激活受体信使核糖核酸（Peroxisome proliferator-activated receptor γ，PPARγ）mRNA表达及颈动脉血管重构的关系。方法50例EH患者分为阴虚阳亢型组，痰湿壅盛型组，每组各25例，另选25例健康体检者为正常对照组。分离各组外周血淋巴细胞，采用逆转录-聚合酶链反应法（reverse transcription polymerase chain reaction，RT-PCR）检测各组PPARγmRNA表达，应用彩色多普勒超声诊断仪测量颈总动脉内膜-中膜厚度。结果与正常对照组比较，两组患者PPARγ mRNA均表达下调，且颈动脉内膜增厚（Plt;0.05）。与阴虚阳亢型组比较，痰湿壅盛型组PPARγ mRNA表达下调及颈动脉内膜增厚明显（Plt;0.05）。结论淋巴细胞PPARγ mRNA表达可能与EH颈动脉重塑相关。 【关键词】 原发性高血压； 证型； 过氧化物酶体增殖物激活受体信使核糖核酸； 逆转录-聚合酶链反应法 原发性高血压病（essential hypertension，EH）是一种多基因遗传与环境因素交互作用而产生的以动脉血压升高为特征的全身性疾病。近年来研究发现过氧化物酶体增殖物激活受体γ（peroxisome proliferator-activited receptor γ，PPARr）与EH具有一定相关性［1］。PPARγ存在于淋巴单核细胞、血管内皮细胞、血管平滑肌细胞，参与调节炎症，细胞增殖/凋亡，动脉粥样硬化等病理过程［2］。阴虚阳亢型和痰湿壅盛型是EH的常见证型。本研究采用通过观察比较此两种证型PPARγ基因表达及颈动脉内膜-中膜厚度，为EH辨证分型提供分子水平依据，并且指导临床用药。 　 　1 资料与方法 　　1.1 研究对象 　　1.1.1 病例选择2008～2009年在石家庄市中 医院 门诊或病房首次确诊为EH阴虚阳亢型25例（设为阴虚阳亢组），痰湿壅盛型25例（设为痰湿壅盛组），健康体检者（设为正常组）25例。各组病例资料见表1。表1 各组病例资料（略） 　　1.1.2 诊断标准西医诊断标准按照2005年《 中国 高血压防治指南》修订版中EH的诊断标准。中医证候诊断标准参照中华人民共和国国家药品监督管理局2002年制定颁布的《中药新药临床研究指导原则·中药新药 治疗 高血压病的临床研究指导原则》中阴虚阳亢型或痰湿壅盛型的诊断标准。 　　1.1.3 纳入标准西医诊断为EH；中医诊断为阴虚阳亢型或痰湿壅盛型。 　　1.1.4 排除标准年龄在 45岁以下或 70岁以上；继发性高血压；感染性疾病患者。 　　1.2 试剂及仪器人淋巴细胞分离液（晶美公司）、Trizol（MRC公司）、半定量逆转录多聚酶链式反应试剂盒（Fermentas公司）、PCR试剂盒（Fermentas公司）、DNA marker（Fermentas公司）、PPARγ引物（上游引物：5’-CAAGACAACCTGCTACAAGC-3’ 下游引物：5’-TCCTTGTAGATCTCCTGCAG-3’， 上海生工工程技术服务有限公司）、β-actin引物（上游引物：5’- TAAAGACCTCTATGCCAACACAGT-3’ 下游引物：5’-CACGATGGAGGGGCCGGACTCATC-3’ ，上海生工工程技术服务有限公司）、琼脂糖（Amresco公司）、EB（Sigma公司）。低温离心机（Journ公司）、PCR仪（PXE0.2，Thermo公司）、电泳仪（DYY-8C型，北京市八一仪器厂）、凝胶成像分析系统（Vilber lourmat公司）、彩色多普勒超声诊断仪（PoRNA表达［3］抽清晨空腹肘静脉肝素抗凝血，1 000 r/min离心1 min，弃上清；盐水与血等体积混匀稀释；1 ml淋巴细胞分离液面上，用滴管沿壁缓慢加2 ml稀释血；2 000 r/min离心20 min；管内分为4层，吸出云雾层（淋巴细胞）；用5×生理盐水稀释，1 500 r/min离心10min，重复1次，分离淋巴细胞。提取细胞总RNA，总RNA逆转录成cDNA，PCR扩增，反应条件：94℃预变性5 min，94℃变性30s，58℃退火45 s，72℃延伸45 s，共35个循环，72℃延伸5 min。PCR产物琼脂糖凝胶电泳，凝胶摄像系统采集电泳图像，用PPARγ条带灰度与β-actin标准条带的比值进行半定量分析。 　　1.4 彩色多普勒超声测量颈总动脉内膜-中膜厚度由专人操作将探头置于颈部纵横扫查