反相高效液相色谱法测定亳菊提取物中木犀草素及芹菜素的含量.docVIP

　　反相高效液相色谱法测定亳菊提取物中木犀草素及芹菜素的含量 作者：潘见　汪翔　杨毅　金日生 【摘要】 目的建立同时测定亳菊提取物中木犀草素及芹菜素的反相高效液相色谱检测方法。方法采用Restek Pinnacle Ⅱ C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)色谱柱，配制流动相为甲醇∶四氢呋喃∶0.3%H3PO4水溶液=42∶13∶56，在流速为1.0 ml/min，检测波长为350 nm，柱温为室温，进样量为10 μl的情况下建立测定方法。结果木犀草素线性范围为3.99～99.75 μg/ml（r=0.999 6），平均加样回收率为105.9%，RSD=1.5%；芹菜素线性范围为4.095～102.375 μg/ml（r=0.999 6），平均加样回收率为103.7%，RSD=2.5%。结论用该方法测定亳菊提取物中木犀草素及芹菜素的含量，具有分析时间较短，分离度高的特点。 【关键词】 反相高效液相色谱法；木犀草素；芹菜素；亳菊提取物 　　Abstract：ObjectiveTo develop a reversed-phase high performance liquid chromatographic method for the simultaneous determination of luteolin and apigenin in Chrysanthemum morifolium extract.MethodsThe separation n（250 mm×4.6 mm，5 μm）obile phase at a flol/min.The absorbance onitored at 350 nm.The volume of injection l～99.75 μg/ml（r=0.999 6）for luteolin and 4.095 μg/ml～102.375 μg/ml（r=0.999 6）for apigenin.The average recoveries ethod used for the determination of luteolin and apigenin in the Chrysanthemum morifolium extract has the characteristics of short retention and high resolution. 　　Key um morifolium extract 中药菊花是菊科植物菊Chrysanthemum morifolium Ramat.的干燥头状花序［1］，是一种常用中药，具有疏风、清热、明目、解毒功效，临床上用于 治疗 高血压病和冠心病等［2］。亳菊主产于安徽亳州、涡阳一带［3］。菊花的有效部位主要有黄酮类、萜类、碳环芳香族酚酸类化合物（蒋惠娣．《中药杭白菊心血管系统作用及活性成分研究》．2004浙江大学博士学位 论文 ）［4］。亳菊提取物成分复杂，为控制其产品质量，依据菊花药效物质及药理作用，建议以绿原酸、木犀草素、芹菜素和总黄酮4个指标，构建质量评价体系。其中木犀草素具有消炎、抗过敏、抗肿瘤、抗菌、抗病毒、降低兔实验性动脉粥样硬化程度和降胆固醇等作用［4，5］；芹菜素具有抗肿瘤、抗炎、降血压和舒张血管、抗动脉硬化和血栓症、抗焦虑、抗菌、抗病毒等作用［6］。两者药理作用与亳菊的药理作用相近，且两者在亳菊提取物中含量较高。因此，建立同时测定木犀草素及芹菜素的HPLC测定方法，对亳菊提取物的质量标准研究及亳菊药材的质量控制具有重要的意义。 　　 1 仪器与试药 poa.morifolium(Ramat.)Tzvel.cv.‘Boju’由安徽济人药业提供］；亳菊提取物样品（农产品生物化工 教育 部工程研究中心研究制备）。 　 　2 方法与结果 　　2.1 色谱条件色谱柱为Restek Pinnacle Ⅱ C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相为甲醇∶四氢呋喃∶0.3%H3PO4=42∶13∶56；流速1.0 ml/min；检测波长350 nm；柱温为室温；进样量10 μl。 　　2.2 对照品储备液的制备精密称取木犀草素、芹菜素对照品适量，用甲醇溶解配制成含木犀草素为399 μg/ml及芹菜素为409.5 μg/ml的对照品混合溶液。 　　2.3 供试品溶液的制备取亳菊提取物样品约75 mg，精密称定置小烧杯中，用10 ml甲醇超声溶解，转移至25 ml容量瓶中并定容摇匀，取部分溶液离心（10 000 r/min，5 min），取上清液即得供试品溶液。 　　2.4 标准曲线的绘制从对照品储备液中精密量取0.1，0.5，1.0，1.5，2.0，2.5 ml，分别置于10 ml容量瓶中