正交优选连翘中齐墩果酸的提取工艺.docVIP

　　正交优选连翘中齐墩果酸的提取工艺 【摘要】 　　目的优选连翘中齐墩果酸的提取工艺。方法以齐墩果酸含量为指标，采用L9(34)正交设计实验，考察了提取时间、乙醇浓度、料液比对提取率的影响,优选出合理的提取工艺。用高效液相测定齐墩果酸的含量。结果优选出齐墩果酸的最佳提取工艺条件是：超声提取3次，40 min/次，90%乙醇溶液，料液比1∶12。结论采用此工艺提取方法快速、简单，可以为进一步研究连翘提供 参考 。 【关键词】 正交实验 齐墩果酸 连翘 　　Abstract：ObjectiveTo optimize the extraction condition of oleanolic acid from Fructus Forsythiae．Methodse、concentration of alcohol and amount of alcohol and ethod．HPLC um extraction condition es (once 40 min)，90% ethanol solution, and 12-fold solvent．ConclusionThe optimized technology is quick and simple，and can be used for theoretical basic． 　　Key lab 54 紫外可见分光光度计(上海棱光技术有限公司)；KQ2200E型超声仪(昆山市超声仪器有限公司)； PH-030干培两用箱（上海一恒科技有限公司）；RE - 52AA型旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）； Sartorius十万分之一 电子 天平(德国)。 　　1. 2 试药药材连翘购自江西省药材公司(产地山西)，经江西医学院冯江教授鉴定为正品连翘；齐墩果酸对照品由中国药品生物制品检验所提供；甲醇为色谱纯,超纯水；其他试剂均为分析纯。 　　 2 方法与结果 　　2.1 色谱条件Kromasil C18柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）；流动相为甲醇-水-0.1%冰醋酸（92∶8∶0.1，V/V/V）；柱温：30℃；流速1 mL/min；检测波长215 nm。 　　2.2 检测波长的确定取对照品溶液，经紫外分光光度计在200～500 nm范围内扫描得知，对照品溶液在203，207，210 nm等处有吸收，但由于流动相在短波长处有末端吸收，为了减少干扰, 因此选择最大的215 nm作为测定含量的吸收波长。 　　2.3 对照品溶液的制备 取对照品105℃恒温干燥至恒重，精密称取10.3 mg齐墩果酸对照品，置10 ml容量瓶中，用流动相溶解，超声5 min，定容至10 ml，得到1.03 mg/ml的对照品溶液。 　　2.4 标准曲线和线性范围的考察 依次精密吸取对照品溶液0.1，0.5，2，3，4 ml后，置10 ml容量瓶中，再加10 ml流动相溶解稀释，分别取10 μl进样3次，记录峰面积，以峰面积值(Y)对齐墩果酸的浓度(X )进行线性回归，得回归方程为Y=3 980 023X-28 536, r=0.999 8。结果表明齐墩果酸在0.01～0.4 mg/ml范围内线性关系良好。 　　2.5 单因素实验 　　2.5.1 提取时间对连翘中齐墩果酸提取量的影响准确称量连翘1 g共15份，分成5组，每组实验重复3次，分别加12倍量的90%乙醇超声提取，5组提取时间分别为20，30，40，50，60min，分别测定齐墩果酸的含量,结果：40 min时提取的含量最大，40 min之前或之后提取量较小。 　　2.5.2 乙醇浓度对连翘中齐墩果酸提取量的影响准确称量连翘1g共12份，分成4组，每组实验重复3次, 分别加12倍量的60%，70%，80%，90%的乙醇，超声提取40 min，3次，分别测定齐墩果酸的含量，结果：90%的乙醇提取的含量最大。 　　2.5.3 料液比对连翘中齐墩果酸提取量的影响准确称量组方中的连翘1 g 共12份，分成4组，每组实验重复3次，加4，8，12，16倍量90%乙醇超声提取40 min，3次，测齐墩果酸含量。结果：12倍量的乙醇和16倍量的乙醇所得含量较大。 从以上单因素实验分析，设计提取时间(A)、乙醇浓度(B)、料液比(C)、空白(D)为考察因素，每个因素各取3个水平。见表1。 　　表1 因素水平（略） 　　2.6 供试品溶液的制备及正交实验把连翘药材研碎，过40目筛，取恒温干燥至恒重的连翘药品，精密称取1g 9份，按表2设计先用石油醚脱脂2次，弃去石油醚，烘干，然后把药渣用乙醇溶液冷浸1 h，超声提取3次，过滤，合并滤液，蒸干，用流动相溶解、超声，过0.45 μm微孔滤膜，定容于10 ml容量瓶中，各取10 μl分别进样