正交实验法优选护肝康片中水飞蓟素纯化工艺.docVIP

　　正交实验法优选护肝康片中水飞蓟素纯化工艺 作者：张良 许沛虎 张雪琼 许可 高媛 张双硕 【摘要】 　　目的优选护肝康片中水飞蓟总黄酮最佳纯化工艺。方法在考察纯化方法的前提下,采用正交实验法，以提取物中总黄酮量和水飞蓟宾的量为考察指标,考察影响水飞蓟素纯化因素。结果水飞蓟总黄酮最佳纯化工艺为采用8%浓缩液，3倍量体积醋酸乙酯萃取2次，10 min /次。结论优选的水飞蓟总黄酮纯化工艺稳定可行。 【关键词】 正交实验 水飞蓟素 纯化工艺 　　Abstract:ObjectiveTo optimize the purification process of total flavonoids from Silybum marianum.Methods On the premise of the best purification method, orthogonal test arin purification es amount of ethyl acetate, 8% concentrated solution, extracting 2 times,10 minuters each time. ConclusionThe optimum purification technology of total flavonoids from Silybum marianum is stable and feasible. 　　Key ; Purification technology 　　护肝康片由单方药材水飞蓟组成, 具有护肝保肝改善肝功能、降低血脂的功效, 可用于各型肝炎的 治疗 。水飞蓟为菊科植物水飞蓟Silybum marianum (L. ) Gaertn的果实。水飞蓟素( silymarin ) 是天然黄酮木脂素类化合物, 为水飞蓟的果实经提取精制而得的混合物。其主要成分为水飞蓟宾、异水飞蓟宾等。水飞蓟素作为抗肝损伤药物具有稳定细胞膜、改善肝功能的作用［1，2］。本实验对水飞蓟中黄酮类物质的纯化方法进行了研究，优化水飞蓟纯化工艺，为水飞蓟中总黄酮提取纯化提供 科学 依据。 　　 1 仪器与试药 　　1.1 仪器　UV1101型紫外分光光度仪（上海天美科学仪器有限公司），安捷伦1100高效液相色谱仪，旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂），超声清洗器（天津赛恩斯科学仪器有限公司）。 　　1. 2 药材与试剂　水飞蓟宾对照品( 中国 药品生物制品检定所，批号：0856-200203) ,水飞蓟药材购自武汉红十字药业有限公司。分析纯甲醇、石油醚、醋酸乙酯，色谱甲醇。 　　 2 方法与结果［3,4］ 　　2.1 对照品溶液的制备精密称取水飞蓟宾对照品11.1 mg，置50 ml容量瓶中，加甲醇定容至刻度, 摇匀，即得。 　　2.2 水飞蓟总黄酮的测定 　　2.2.1 最大吸收波长确定精密量取水飞蓟宾对照品溶液5 ml，置50 ml容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀。以甲醇溶液为空白溶液，在200～800 nm范围内扫描,得到其吸收光谱。结果表明在287 nm对照溶液具有最大吸光值，所以确定287 nm为测定波长。 　　2.2.2 供试品溶液的制备精密称取水飞蓟提取物约0.1 g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇溶液25 ml，密塞，称定重量，超声处理（功率250 in，放冷，再称定重量，用甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 　　2.2.3 标准曲线的制备精密吸取“2.1”项下对照品溶液2，4，6，8，10 ml，至10 ml量瓶中，分别加甲醇定容至刻度，在287 nm波长处测定吸收度。以对照品浓度为横坐标，吸收度为纵坐标，绘制标准曲线，求解线性回归方程：A=0.043 7C＋0.017 7，r=0.999 9。线性范围为4.44 ～22.2 μg/ml。 　　2.2.4 样品含量测定精密量取1 ml供试品溶液置25 ml容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀。以甲醇为空白液,在波长287 nm处测定吸光度， 计算 总黄酮的量。 　　2.3 水飞蓟宾的测定 　　2.3.1 色谱条件的选择色谱柱为Kromasil C18(250 mm ×4.6 mm , 5 μm)，流动相为甲醇：乙腈：0.5%冰醋酸(40∶5∶55, 体积比)；检测波长287 nm；流速1 ml/min；柱温30 ℃。 　　2.3.2 样品含量测定精密量取对照品溶液5 ml置10 ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。精密量取供试品溶液1 ml置25 ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。分别精密吸取对照品溶液与样品溶液各5 μl，注入液相色谱仪以外标法计算样品溶液中水飞蓟宾的含量。 　　2.4 提取样品的制备称取水飞蓟药材300 g，粉碎，脱