正交法提取木耳多糖及对大鼠血清超氧化物歧化酶和体外肝脏脂质过氧化的影响.docVIP

　　正交法提取木耳多糖及对大鼠血清超氧化物歧化酶和体外肝脏脂质过氧化的影响 作者：田志杰， 吕世杰， 姜艳霞， 王程， 罗君， 李妍 【摘要】 目的用正交法优选木耳粗多糖的提取工艺及其对血清超氧化物歧化酶（SOD）及肝脏体外脂质过氧化的影响。方法选取料水比、温度、提取次数以及提取时间为考察因素，采用正交法L9（34）为方案，确定木耳粗多糖提取的最佳工艺。按15 mg·kg-1·d-1(为人类摄取木耳中木耳多糖的10倍)给DA）含量分别采用邻苯三酚自氧化和TBA法测定。结果木耳多糖的最佳提取条件是：料水比为1∶45，提取温度为80℃，水提时间1 h，提取次数3次，得率4.37%；灌胃大鼠较空白组肝脏的MDA含量明显下降（Plt;0.05）；血清SOD活性对邻苯三酚自氧化抑制率明显提高(Plt;0.05)。结论优化条件可提高木耳粗多糖产率,并保证较高多糖的含量和安全性；木耳多糖应用于抗衰老和保肝作用前景良好。 【关键词】 木耳多糖； 正交法； 超氧化物歧化酶； 丙二醛 木耳Auricularia auricula （L.） Underl，sevag法脱蛋白3次，根据木耳粗多糖的分子量选择10 000～12 000的透析袋，蒸馏水透析3 d，浓缩后，用2倍于浓缩液的无水乙醇进行醇沉，根据乙醇的挥发温度在80℃水浴下挥干，得灰白色片状物。蒽酮法测定多糖含量。正交结果见表2。 　　结合对正交实验数据的分析可得出提取工艺为A2B2C1D3，即料水比为1∶45，水提温度为80℃，水提时间为1 h，水提次数为3次。根据极差值可知，各因素对提取率影响的大小依次为水提次数、水提时间、料水比和水提温度。表2 正交实验产率及SPSS13.0得到的预测产率（略） 　　2.3 木耳粗多糖中糖含量的测定 　　2.3.1 对照品溶液的制备称取105℃干燥至恒重的葡萄糖0.102 0 g，置于100 ml容量瓶中，分别吸取0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2，1.4，1.6 ml定容至10 ml，即得不同浓度的标准液。 　　2.3.2 样品溶液的制备分别精密称取不同条件下提取的木耳粗多糖10 mg，置于100 ml的容量瓶中，80℃恒温水浴溶解，定容，即得样品。 　　2.3.3 绘制标准曲线分别取不同浓度标准液2 ml，加入2%的蒽酮-硫酸试剂（内含1%硫脲，下同）5 ml，沸水浴中加热10 min，取出后流水冷却，在620 nm波长下比色，得回归方程：Y=6.880 4X+0.001， R2 =0.991 4 ， 浓度与A值所做标准曲线如图1。 　　2.3.4 样品中糖的含量的测定精确称取不同条件下木耳粗多糖1 ml+1 ml H2O，加入2%的蒽酮-硫酸试剂5 ml，沸水浴中加热10min，取出后流水冷却，在620 nm波长下比色（见表3）。木耳粗多糖中平均总含糖量为50.1%。表3 木耳多糖含量（略） 　　2.4 木耳多糖对血清SOD及肝脏体外脂质过氧化的影响DA的肝匀浆1.0 ml于试管中，再加入蒸馏水1 ml，对照组取蒸馏水2 ml代替，混匀后于37℃空气恒温浴震荡器中振荡1.5 h，取出后加入10%的三氯醋酸2.0 ml，0.67%TBA 1.0 ml，混匀后在沸水浴中反应15 min，取出后流水冷却，以3 000 r/min离心15 min，其上清液在532 nm波长处比色，测定A值，计算对MDA的抑制率，此间接反应实验条件对肝脏MDA的影响。实验结果的值进行t-检验。结果见表5。　表5 木耳多糖对体外肝脏脂质过氧化的作用（略） 　　抑制率I（%）=（A对照-A样品）/A对照×100% 　 　3 讨论 　　本实验的提取剂采用蒸馏水，尽管木耳粗多糖得率低于酸碱及各种酶参与的提取，但环保且提取的木耳多糖没有有害物质的残留，而且含糖量比较高，适合应用于保健及 治疗 过程。 　　通过正交实验对木耳多糖的提取工艺条件进???优化，在料水比为1∶45、水提温度为80℃，水提时间为1 h，水提次数为3次的条件下比批量生产木耳多糖的产率高出3～5倍。根据极差值看出，提取温度对得率影响最小，可以降低温度，节省资源。 　　对DA的含量（Plt;0.05），保护肝脏。 【 参考