正交实验法优选白疕消软膏中的药材提取工艺.docVIP

　　正交实验法优选白疕消软膏中的药材提取工艺 【摘要】 目的优选白疕消软膏中的药材提取工艺。方法以银屑病小鼠模型实验结果为指标，采用L9（34）正交实验法，对其关键步骤如加水量、煎煮时间、煎煮次数、醇沉时加醇量等条件进行优选。结果煎煮次数对小鼠鼠尾鳞片表皮颗粒层生成有显著性影响（P＜0.05）。结论最佳工艺为加药材量8倍的水煎煮3次，1.5 h/次，浓缩液加等量乙醇使沉淀。 【关键词】 白疕消软膏 正交实验 银屑病小鼠模型 提取工艺 白疕消软膏为中药外用制剂，具有清热解毒、活血化淤、疏风通络功效，用于白疕血热、血淤证（寻常性银屑病）。其中的大黄等药材是通过银屑病抗体搭桥角朊/单一核白细胞粘连实验筛选出的抗银屑病中草药，因在进行抗银屑病中草药试验筛选时各实验药液的制备均采用的是水提醇沉法，故本制剂中对大黄等药材提取也采用同一方法。本文小鼠银屑病模型实验结果为指标，对影响水提醇沉的主要因素如加水量、煎煮时间、煎煮次数、醇沉时加醇量，进行正交实验优选，为合理筛选大黄等药材的提取工艺提供 科学 依据。 1 仪器与试药 显微镜（日本奥林巴斯BX51，带JVC摄像头及图像采集处理系统）。哈西奈德溶液（唐山集川药业利康制药有限公司生产，批号050501），0.9%氯化钠注射液（生理盐水，武汉滨湖双鹤药业有限责任公司生产，250 ml/瓶，批号060113306）。 2 方法与结果 2.1 正交实验设计 以影响提取的几个主要因素如煎煮时间、煎煮次数、加水量、醇沉时加醇量为考察因素，每个因素设立3个水平，因素水平安排见表1表1 因素水平 2.2 样品的制备 按5倍处方量称取大黄等药材，共9份，分别按表2的实验条件煎煮，过滤，减压浓缩至适量，加乙醇使沉淀，过滤，滤液减压回收乙醇，调整全量至每毫升相当于生药2 g，即得。表2 正交实验结果与分析 2.3 银屑病小鼠模型实验［1～5］ 2.3.1 动物 昆明种小鼠66只，♂，体质量（27.2±2.7）g，普通级，由湖北省实验动物中心提供。 2.3.2 方法 取昆明种小鼠，常规饲料喂养，随机分成11组，每组6只，实验组用正交设计下的9份样品，阴性对照组用生理盐水，阳性对照组用哈西奈德溶液，在每只小鼠尾部均匀涂抹（约0.5 ml），2次/d，连续15 d，次日处死小鼠，取距离根部约0.5～1.5 cm处尾部皮肤，10%甲醛溶液固定，石蜡包埋，HE染色，在光学显微镜下观察每个小鼠的尾部鳞片（见图1）。凡两个毛囊口之间的鳞片表皮有排列成行的颗粒层者，称为有颗粒层的鳞片，计数每100个鳞片中有颗粒层的鳞片数，对各组数据进行比较，并作统计学处理。结果见表3。 .L.编辑。 2.4 方差分析 将正交实验结果用方差分析。结果见表4。 3 讨论 3.1 最佳提取条件的确定 正交实验结果经直观分析（见表2）可以看出，对小鼠尾部鳞片表皮颗粒层形成的促进作用最强提取条件为：A2B3C1D2。正交实验结果方差分析（见表3）可以看出，对于小鼠尾部鳞片表皮颗粒层形成的促进作用，因素B均有显著性影响（P＜0.05），因素A无显著性影响。正交实验结果极差分析表明，4个因素对小鼠尾部鳞片表皮颗粒层形成的促进作用的影响顺序均为B＞D＞C＞A。根据上述正交实验结果的分析，结合生产经验，综合考虑，将最佳提取条件确定为A2B3C1D2，即加药材的8倍量水煎煮3次，1.5 h/次，煎煮液浓缩至适量后加等量乙醇使沉淀。 表3 对小鼠鼠尾鳞片表皮颗粒层生成的影响1与阴性对照组比较，P2与阳性对照组比较；n=6表4 方差分析 3.2 动物实验评价 在表皮层中，角质层增厚，其间有排列成层的角化不全细胞，层与层之间充满空气，使鳞屑显为白色。在静止期病变,表皮角化过度或角化不全明显。在角化不全的部位下方，颗粒层的细胞很少或完全消失。银屑病的基本病理特点是表皮细胞增殖过快和角化不全，一种药物如能抑制表皮细胞的增生，或者改善角化不全(促进颗粒层形成)者，就具有 治疗 银屑病的药理作用［1，2］。正常情况下小鼠尾部鳞片的表皮胶质层角朊细胞保留有细胞核，而颗粒层颗粒细胞缺失，仅在毛囊处有少量的颗粒细胞，表皮较薄，其天然的角化形式与人类银屑病表皮相似，故可模拟该病角化不全的特点，Jarrett和Spearman等利用它作为实验模型，评价药物促进颗粒层形成的作用［4］，很多学者在实验中证明治疗银屑病临床有效的中药普遍具有促进小鼠尾鳞片表皮颗粒层形成作用［5］。本实验中利用这种动物模型对正交实验的各组药液对小鼠尾部鳞片表皮的颗粒层形成作用进行评价，实验结果显示，促进颗粒层的形成作用，与阴性对照组比较作用较强（除实验组1，4外，均有显著性差异，P＜0.01)，但与阳性对照组比较则作用较弱（除实验组6，均有显著性差异，P＜0