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内蒙古地区蒙汉民族人群HLA-DRB1基因多态性 与支气管哮喘关系的研究 【摘要】 2005级研究生 朱淑芬 导 师 董京生 教授 陈春华 副教授 专 业 呼吸内科 立体背景 支气管哮喘(简称哮喘)是一种气道的慢性炎症性疾病, 并有一定的家族倾向。支气管哮喘其发病涉及了遗传、免疫、环境等诸多因素。通过微卫星(microsatillate)DNA多态性连锁分析的方法,已在几条染色体上定位了与哮喘表型相关的特殊基因座位。[1] 人类白细胞抗原(HLA)系统基因,是位于人的第六号染色体短臂(6P23.1)片段上紧密连锁的基因复合体,全长约3500Kb。根据各功能区的功能又将HLA系统分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ大类,即移植排斥调节基因、免疫应答调节基因和补体基因。现已证明不同的HLA等位基因及其产物在哮喘发病中起保护性作用或为哮喘的易感因素。HLA-Ⅱ类基因在调节免疫应答中起重要作用, 并且具有高度的多态性,它包含HLA-DR、HLA-DQ、HLA-DP三个亚区，其中HLA-DR亚基因与支气管哮喘发病关系密切[2]，已被许多研究证实。在HLA_Ⅱ类分子中以DRB1最具多态性,它包括160个以上的等位基因[3],对于免疫应答起着决定性作用,且迄今所建立的HLA的DNA分型技术也以对HLA_DRB1多态性的分析最为成熟,故我们将研究重点放在HLA－DRB1上,旨在探讨蒙汉民族人群支气管哮喘与HLA-DRB1的相关性。 关于HLA-DRB1等位基因的研究,国内外均见报道,但由于地域、人种的不同结果亦不同。国际HLA组织以家系为基础的研究证实了HLAⅡ类基因与尘螨诱导的哮喘间的关系。Aron[4]等报道,哮喘患者DR4,DR7频率较对照组明显升高。Chauhan等[5]研究认为哮喘与HLA-DR2、DR5、DR4、DR7相关,提示HLA_DR分子可能存在诱导疾病发生的肽链。Kalpaklioglu等[6]报道哮喘患者HLA_DRB1*0701、DQB1*02基因频率增加,认为土耳其人先天性过敏症与该两个基因有关。Chapo-ral等[7]研究认为:有着易感基因的患者,在接触过敏原的环境中,有着更高的敏感性,HLA_DQ、DR与哮喘的免疫应答强相关。,但是也有少数学者持相反意见,如Moffatt[8]认为基因与此病无关联。国内学者的研究结果不尽相同。高金明[9]等证明，哮喘患者中DR6(13), DR52基因频率明显增高,而DR2(15)和DR51的基因频率则明显降低。王崇刚[10]采用顺序特异引物聚合酶链反应技术检测山西汉族64例哮喘患者HLA-DRB1等位基因频率,发现其HLA-DRB1*1501-1502(相应血清为HLA-DR2(15))基因频率较正常人明显增高(P0.05)。也有学者采用PCR-SSP,SSOP方法未能证实哮喘与HLA-DRB等位基因间的关系。LI[11]等人在对中国南方人哮喘的HLA的多态性研究中，没有发现HLA-DR与哮喘有相关性。在HLA-DRB1基因与阿司匹林诱发的哮喘的研究中，也没有发现有相关性存在。[12] 目的及意义 　　用分子生物学的方法研究HLA-DRB1基因在蒙族及汉族哮喘患者中的分布及其与哮喘之间的关系, 从免疫遗传学角度探讨蒙汉民族支气管哮喘发病的遗传学特征，推断哮喘患者遗传易感基因和保护基因，为今后支气管哮喘病因学研究及治疗学提供一定依据。 资料与方法 1.研究对象： （1）祖籍三代居住在内蒙古地区无血缘关系、异族通婚史，无高血压、糖尿病、免疫系统疾病、炎性肠病等与HLA相关疾病及家族史的汉族哮喘患者50例，蒙古族哮喘患者50例，健康汉族和健康蒙族各50例作为对照。 （2）诊断标准：收集病例均符合2002年11月中华医学会呼吸病学分会制定的标准 ①反复发作喘息、气急、胸闷或咳嗽，多于接触变应原、冷空气、物理、化学性刺激、病毒性上呼吸道感染、运动等有关。 ②发作时在双肺可闻及散在或弥漫性、以呼气相为主的哮鸣音，呼气相延长。 ③上述症状可经治疗缓解或自行缓解。 ④除外其他疾病所引起的喘息、气急、胸闷和咳嗽。 ⑤临床表现不典型者（如无明显喘息或体征）至少应有下列三项中的一项ａ支气管激发 试验或运动试验阳性；ｂ支气管舒张试验阳性；ｃ昼夜PEF变异率≥20%。 符合①-④条或④、⑤条者，可以诊断为支气管哮喘。 （3）入选病例均为门诊和住院患者 （4）健康汉族和健康蒙族为我院健康体检者及本院教职工、学生。 2．试剂及仪器： （1）超低温冰箱、离心机、基因扩增仪、电泳仪、全自动凝胶成像系统、紫外透射检测仪等（内蒙古医学院中心实验室） （2）DNA提取试剂盒（北京天为时代科技有限公司） （3）引物等PCR扩增所需试剂（北京奥科生物技术有责