基于16S rRNA序列鉴定临床不常见细菌.pdfVIP

实用医技杂志 2013 年 12 月第 20 卷第 12 期 Journal of Practical Medical Techniques， December 2013， Vol. 20， No. 12 ·1275 · 基于 16S rRNA 序列鉴定 临床不常见细菌 广东省佛山市第一人民医院（528000） 吴智刚 李小蓝 吴奎海 【摘 要】 目的 以 16S rRNA 基因为靶序列，建立核糖体测序方法鉴定临床不常见细菌。 方法 利用通用引 物聚合酶链反应（PCR）扩增细菌 16S rRNA 基因，对 PCR 产物进行测序，在 GenBank 中对测序结果进行 Blastn 分析。 结果 10 株临床常见细菌测序结果与表型鉴定符合， 检测出 4 株临床不常见细菌。 结论 16S rRNA 基因测序可以 作为鉴定临床不常见细菌的重要方法之一。 【关键词】 细菌； 16S rRNA； 序列分析 Identification of clinical uncommon bacteria by sequence analysis of 16S rRNA gene WU Zhi gang， LI Xiao lan， WU Kui hai. The First People′s Hospital of Foshan， Guangdong 528000， China 【Abstract】 Objective To establish a method by 16S rRNA gene sequencing to identify clinical uncommon bacteria. Methods Amplification and sequencing of 16S rRNA gene of bacteria were performed using universal primers. Searches of current nucleotide databases in GenBank were carried out with the blastn algorithm. Results Ten clinical common bacterial isolates were accurately identified. Four clinical uncommon bacterial isolates were detected. Conclusion 16S rRNA gene sequencing for identification of clinical uncommon bacteria is an excellent method. 【Key words】 Bacteria； 16S rRNA； Sequence analysis 16S rRNA 基因是细菌染色体编码 rRNA 相对 TC 3′，目的片段 996 bp。 PCR 反应总体积 50 μL，10×buffer 5 应的 DNA 序列，存在于所有细菌及衣原体、立克次 μL，dNTP 终浓度为 200 μmol/L，上下游引物终浓度分别为0.2 体、支原体、螺旋体、放线菌等原核生物的染色体基 μmol/L，DNA 模板 1 μL，TaqDNA 聚合酶 1.25 U，加入灭菌去 离子水至 50 μL。 反应条件为 94 ℃预变性 10 min；94