辣椒素经大鼠肠黏膜的区段透过特性.docVIP

　　辣椒素经大鼠肠黏膜的区段透过特性 作者：段炼，李国锋，孙亚彬，周望梅，李科 【摘要】 目的 研究辣椒素经大鼠空肠、回肠和结肠黏膜的区段透过特性。方法 应用体外Ussing Chamber法，评价100 μg·mL-1辣椒素经空肠、回肠和结肠黏膜的经时吸收方向的累计透过量，并 计算 表观渗透系数,辣椒素在接收池中的浓度用HPLC法测定。结果 辣椒素经结肠和回肠的透过性显著高于空肠，在结肠的透过性也显著高于回肠。结论 辣椒素在大鼠肠黏膜中的透过性存在区段性差异，在空肠部位吸收最差，结肠部位吸收最好，可考虑将其制成结肠定位肠溶片。 【关键词】 辣椒素;Ussing Chamber;肠黏膜;透过性 　　Abstract:Objective To investigate the permeability of capsaicin across the jejunum, ileum and colonic membranes in rats. Methods odel868);戊巴比妥钠[ 中国 医药(集团)上海化学试剂厂];辣椒素标准品(购于SigmaAldrich);甲醇为色谱纯;其余试剂为分析纯; SD雄性大鼠 (南方医科大学实验动物中心提供，许可证号：SCXK粤20060015),体质量(250±20) g。 　 　2 方法 　　2.1 色谱条件 色谱柱为Ecosil C18 (150 mm×4.6 mm,5 μm)，流动相：甲醇水(体积比70∶30)，流速:1.2 mL·min-1，分析时间：7 min，检测波长：280 nm。 　　2.2 体外Ussing Chamber实验 　　2.2.1 溶液配制 　　HepesTris缓冲液的配制(现配现用):取Hepes约6 g，精密称定，用800 mL蒸馏水使之完全溶解。通入混合气体(95%O2∶5%CO2)10 min后，加入3 mol·L-1 KCl溶液1.8 mL，1 moL·L-1CaCl2溶液1.8 mL，1 mol·L-1MgSO4溶液0.8 mL， NaCl 8.18 g，完全溶解后用Tris溶液(1 moL·L-1)调节pH至7.4，再加入1 moL·L-1葡萄糖溶液5 mL，用蒸馏水稀释至1 000 mL，混匀即得。 　　辣椒素供试液的配制:称取辣椒素100 mg，用乙醇定容至10 mL容量瓶中，得到10 g·L-1储备液，精密量取1 mL储备液，用HepesTris缓冲液定容至100 mL，混匀即得质量浓度为100 μg/mL的供试液。 　　2.2.2 空肠、回肠和结肠黏膜透过实验 　　雄性SD大鼠6只，体质量为(250±20)g，禁食16～18 h, 3%戊巴比妥钠腹腔注射(12 mL·kg-1)麻醉，延腹中线将腹部切开2.5 cm左右，将小肠顶部的5 cm去除，接着的10 cm小肠作为空肠，最后的10 cm作为回肠。大肠的最初2 cm去除，接着的6 cm被作为结肠。分别用生理盐水清洗干净，置入冰浴的HepesTris缓冲液中通混合气(95%O2∶5%CO2)培养。剪取空肠3～4 cm，于冰浴板上迅速剥离浆膜侧的浆膜层，将肠黏膜固定于扩散池上，回肠及结肠的操作方法与空肠相同，扩散室的有效面积为1.78 cm2。在扩散室加入7 mL辣椒素溶液(0.1 g·L-1)，接收室加入7 mL HepesTris缓冲液(均预热至37.5 ℃);37.5 ℃保温，并通入混合气体。分别于30、60、75、90、120 min在接收室取样0. 5 mL，并同时补充相同体积、相同温度的HepesTris缓冲液。 　　2.2.3 结果的处理 用0.1 g·L-1辣椒素分别对大鼠空肠、回肠和结肠做体外Ussing Chamber实验，HPLC检测透过药物含量，用下列公式计算各透过参数：(1)累积透过量(Qtn，单位：mg) =7Ctn+∑n-1i=10.5Ct(n-1),式中，0.5和7表示取样体积和加入药液量分别为0.5 mL和7 mL，Ctn表示给定时间点接收室药物浓度;(2)累积透过率(%)=Qtn/D×100，式中的D为给药剂量;(3)表观渗透系数(Papp，单位：cm·s-1)=(dQ/dt)×(1/AC0)，其中dQ/dt表示稳态时时间-累积透过量线性回归所得斜率，A为有效渗透面积1.78 cm2，C0为扩散室加入的初始药物浓度。 　 　3 结果 　　3.1 方法学考察结果 　　3.1.1 线性关系考察 精密称取辣椒素0.010 g，用乙醇定容至100 mL,得到0.1 g·L-1的辣椒素贮备液，将上述贮备液用乙醇依次等倍稀释，分别得到质量浓度为25 000、12 500、6 250、3 125、1 562.5、781.25、390