蹄叶橐吾乙醇提取物对肝细胞色素P450的影响.docVIP

　　蹄叶橐吾乙醇提取物对肝细胞色素P450的影响 【摘要】 　　目的研究蹄叶橐吾乙醇提取物对大鼠和小鼠肝细胞色素P450（CYP450）的影响。方法蹄叶橐吾乙醇提取物口服给药后，观察其对小鼠戊巴比妥钠催眠作用的影响、对大鼠肝微粒体CYP450含量、肝脏指数的影响，采用HPLC测定探针药的代谢率观察其对大鼠肝CYP450的7种亚型酶活性的影响。结果蹄叶橐吾乙醇提取物对戊巴比妥钠诱导小鼠的睡眠时间无影响，大鼠肝CYP450含量及肝脏指数无显著变化，对大鼠肝CYP450的7种亚型探针药的代谢率亦无影响。结论蹄叶橐吾乙醇提取物对肝药酶无诱导作用。 【关键词】 蹄叶橐吾； 肝细胞色素P450； 诱导作用 细胞色素P450（cytochrome P450, CYP450）是生物体内参与各类外源性及内源性物质代谢的主要酶系，负责90%以上药物的生物转化。CYP450的活性可受到多种因素的影响。近年来，由于药物代谢性相互作用诱发的不良反应日渐引起人们的重视。但有关中草药对CYP450影响作用的报道尚不多见。蹄叶橐吾（Ligularia fischeri） 为菊科（pasitae）橐吾属(Ligularia)多年生草本植物，又名肾叶橐吾（《中药志》）、马蹄叶（东北）等，其根和根茎收入吉林省药材标准，名山紫菀［1］。药理研究表明，其根和根茎具有镇咳祛痰作用［2］，叶的提取物具有抗氧化作用［3，4］，地上部分乙醇提取物具有抗炎免疫［5，6］和抗溃疡作用［7］。且蹄叶橐吾的安全性较高［8，9］。本实验通过研究蹄叶橐吾地上部分乙醇提取物对肝CYP450的影响，预测其在联合用药时可能会产生的代谢性相互作用，对蹄叶橐吾临床合理用药提供 科学 依据。 　 　1 材料与仪器 　　1.1 药品蹄叶橐吾（野生）在吉林省珲春市采集，由延边大学药学院刘永镇教授鉴定。蹄叶橐吾地上部分乙醇提取物（ethanol extract from Ligularia fischeri，以下简写为Lfe）的制备：蹄叶橐吾地上部分晾干、粉碎，用95%乙醇加热回流提取，滤液加水放置24 h，过滤后用石油醚萃取，水层加热浓缩至浸膏，每克相当于20 g生药，实验用其水溶液灌胃给药。 　　1.2 试剂非那西汀（phenacetin），双氯酚酸（Diclofenac），奥美拉唑（Omeprazole），氢溴酸右美沙芬（Dextromethorphan Hydrobromide），氯唑沙宗（Chlorzoxazone），氨苯砜（Dapsone, aminophenylsulfone）均购于 中国 药品生物制品检定所, 香豆素（Coumarin）购于沈阳市试剂三厂（化学纯）。葡萄糖-6-磷酸（D-Glucose 6-phosphate disodium salt hydrate）、氧化型辅酶Ⅱ (β-Nicotinamide adenine dinucleotide phosphate sodium salt hydrate , β-NADP)和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(Glucose-6-phosphate Dehydrogenase) 购于sigma公司。戊巴比妥钠，Serva进口分装（上海化学试剂分装厂）。HPLC级甲醇、乙腈购于美国Fisher公司。 　　1.3 仪器美国Thermo Finnigan surveyor高效液相色谱仪（配有四元泵、自动进样器、二极管阵列检测器）；Xcalibur 1.4色谱工作站；Agilent XDB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；日本岛津Shimadzu UV-260紫外可见光分光光度计；MQX-200酶标仪（美国Bio-Tek Instruments Inc.）；EYELA旋转蒸发仪（N-1000 SD-2000）；BECKMAN公司高速冷冻离心机；2K-15型高速离心机(Sigma)；YKH-3型液体快速混合器（江西医疗器械厂）；瑞士METLER TOLEDO公司AG135型 电子 天平。 　　1.4 动物昆明种雄性小鼠，体质量（20 ±2） g；S缓冲液（含0.05mol·L-1 Tris，3 mmol·L-1 MgCl2，0.2 mol·L-1蔗糖，pH 7.4）匀浆后于4℃，10 000 g，离心30 min，取上清液转移至超速离心管内，4 ℃离心，100 000 g，60 min，沉淀即为肝微粒体。重悬后分装，置-80℃ 冰箱内保存备用。微粒体蛋白浓度采用Bradford法测定［10］。 　　2.2.2 CYP450含量及肝脏指数的测定采用Omura和Sato的方法测定CYP450含量［11］。P450(nmol·mg-1蛋白) =［Δ A ( 450 nm - 490 nm)×1000］/91×蛋白浓度