甘薯NBS类抗病基因类似物的分离与序列分析.PDFVIP

热带亚热带植物学报 2006，14(5)：359—365 JournalofTropicalandSubtropcialBotnay 甘薯NBS类抗病基因类似物的分离与序列分析 陈观水 ，周以飞b，林 生b，潘大仁a (福建农林大学，a．生命科学学院；b．作物科学学院，福州 350002) 摘要：利用 已克隆植物抗病基因NBS(Nucleotidebindingsite)序列中的保守模体(motif)“P-loop”和 “GLPL”合成简 并引物，以甘薯(omo~abatatas)栽培品种青农 2号基因组DNA为模板进行PCR扩增，通过T／A克隆、测序和序列分 析，共得到 l5条具有连续 ORF的抗病基 类似物(Resistancegeneanalogues，RGAs)序列，它们之间核苷酸序列间的相 似性系数在 41．2％一99-4％之间，而相应推测的氨基酸序列问的相似性系数在 20．6％一l00％之间，同时对分离的RGAs 的核苷酸和氨基酸序列进行系统 发育树分析，表明甘薯RGAs可分为 TIRfDrosophilaTollOrhumaninter1eukin receptor—like)和 nonTIR两类。对 甘薯RGAs和 5个 已克隆植物NBS的氨基酸序列进行结构分析表明，它们包括 “P—loop”、“Kinase一2”、“Kinase一3a”、“GLPL”4个抗病基因所共有的保守模体 。这些表明甘薯与其它物种的NBS 类 RGAs可能具有同样的起源和进化机制。 关键词：甘薯；NBS；抗病基因类似物；基凶分离；序列分析 中图分类号 ：Q943．2 文献标识码 ：A 文章编号 ：1005—3395(2006)05—0359—07 IsolationandSequenceAnalysisofNBS-typeResistance GeneAnaloguesinSweetPotato(Ipomoeabatatas(L．)Lam．) CHEN Guan—shui， ZHOU Yi—fei， LIN Sheng PAN Da—rena ， ( AgricultureandForestryUniversity；a．Collegeof￡ Science；b．College ofCropScience，Fuzhou350002．China) Abstract：Degenerateprimersbasedonconservedmotif(P—loopandGLPL)ofthenucleotidebindingsite(NBS) regionfromtheclonedplantdiseaseresistancegeneswereusedtoisolateresistancegeneanalogues(RGAs)from genomicDNAofthesweetpotato(omoeabatatas(L．)Lam．)cultivarQingnongNo．2．Thedesiredbands (-500bp)werepurifiedflom thegel，andthenclonedbyT／A cloning．Aftersequencingandanalyzingby alignment，15RGAswithuninterruptedopenreadingflames(ORFs)wereobtained．Sequenceidentityamongthe 15RGA nucleotidesequencesrangedflom 41．2％ to99．4％． whilethe15RGAsdeducedaminoacidsequences showedidentiytrangedfrom 20．6％ to100％．ThephylogeneticanalysesforRGA nucleotidesequencesandthe deducedaminoacidsshowedthatRGAsfrom sweetpoattoweredividedintotwogroups，TIR (DrosophilaTollor