半仿生法提取白附子的工艺研究.docVIP

　　半仿生法提取白附子的工艺研究 作者：曹志友　王新城　欧阳瑾　雷钧涛 【摘要】 目的优化白附子最佳提取工艺。方法以β-谷甾醇得率为指标，在提取次数、提取工艺、浸渍剂浓度等条件相同时，考虑乙醇溶液pH 值、提取时间、提取温度，选用L16(45)正交进行实验，确定最佳提取工艺。结果最佳提取工艺为第1煎提取液pH为7，第2煎提取液pH为9, 提取温度85℃,提取时间6 h。结论半仿生提取法优选白附子最佳提取工艺，方法简便，可行。 【关键词】 白附子；半仿生提取法；β-谷甾醇；正交设计 　　Abstract：ObjectiveTo optimize the semi-bionic extraction of Rhizoma Typhonii.MethodsUnder the unchanged conditions including extracting frequency, extracting course and concentration of solvent , a Typhonii as index as index, L16(45) orthogonal design perature, and extraction time. ResultsThe first extraction pH perature e ization of semibionic extraction methods of Rhizoma Typhonii by orthogonal design is available. 　　Key giganteum Engl属天南星科植物，《神农本草经》中被列为上品。功能祛风痰，通经络，镇痉止痛，散结解毒，主要用于中风痰壅，口眼斜，半身不遂，破伤风，头痛，风湿痹痛，肢体麻木，瘰疬痰核，阴疽肿毒，毒蛇咬伤 治疗 。近年报道其治疗癌症效果显著。白附子可降低瘤细胞增殖率，减低瘤细胞的侵袭性，恢复机体免疫功能，对瘤细胞具有细胞毒作用［1～3］。白附子所含有效成分主要为β-谷甾醇、β-谷甾醇-D-葡萄糖苷，内消旋肌醇，胆碱，尿嘧啶，琥珀酸，棕榈酸，亚油酸，三亚油酸甘油酯，二棕榈酸甘油酯，并含白附子凝集素等易溶于醇的物质。白附子中主要有效成分β-谷甾醇( Chlorogic acid)具有抗肿瘤的活性，以β-谷甾醇为指标研究其最佳提取工艺是吉林省 教育 厅重点课题的一个主要部分。 本实验采用半仿生提取法优选白附子最佳提取工艺。 　 　1 仪器与材料 紫外分光光度计（UV1100型， 中国 ，北京瑞利分析仪器公司）；旋转薄膜蒸发仪（RE-52AA型，中国，上海亚荣生化仪器厂）；循环水式真空泵［SHZ-D(III)，中国，巩义市予华仪器有限责任公司］； 电子 天平（沈阳龙腾电子有限公司）；数控超声波清洗器（KQ-100DB型，中国，昆明市超声仪器有限公司）。 　　白附子的块茎（购于大千药业，由吉林医药学院雷钧涛副教授鉴定为天南星科植物Typhonium giganteum Engl的干燥块茎）。β-谷甾醇标准品（上海融禾医药科技有限公司，批号：080109），所用试剂均为分析纯。 　　 2 方法与结果 　　2.1 半仿生正交实验 　　设计本文设计在提取工艺、乙醇浓度相同的条件下，用不同pH 值的乙醇进行提取，并考虑提取温度及提取时间等因素，选用L16(45)正交表安排实验。见表1。表1 因素水平（略） 　　提取液乙醇浓度为95%，第1煎、第2煎固液比均为1∶6，二煎时间比为2∶1，pH 值的调节用稀HCl 和Ca(OH)2 饱和溶液。 　　2.2 样品液的制备 　　将白附子去皮后切成碎末，称重为20 g，装入250 ml圆底烧瓶，按正交实验列号在恒温水浴中加热回流提取两次(两次回流温度均相同，加醇量均为药材量的6倍，第1 煎醇pH 值用稀HCl调至规定值，第2煎水的pH值用饱和Ca(OH)2调至规定值，醇的pH值及提取温度、提取时间按表2) 滤过，合并滤液，浓缩至浸膏（相对密度为1.12）。 　　2.3 标准曲线的绘制 　　精密称取9 mg β-谷甾醇标准品，用CHCl3定容到5 ml容量瓶中为对照液。将对照液以CHCl3为空白，在200～400 nm波长范围内扫描。β-谷甾醇在234 nm下有最大吸收。用刻度移液管分别准确量取对照液0.2，0.4，0.6，0.8，1.0 ml于5 ml容量瓶中，加CHCl3至刻度，摇匀。以CHCl3为空白，在紫外分光光度计上测其吸光值，以吸光值为纵坐标，以浓度为横坐标绘制标准曲线。Y = 0.001 3X+0.074 , R2=0.997 8。 　　2.4 β-谷甾醇的测定 　　将提取物干膏用CHCl3溶解并定容于25 ml容量瓶中，精密量取1 m