成骨细胞各因子的检测方法.pdf

中国骨质疏松杂志　 ２０１３年１０月第１９卷第１０期　 Ｃｈｉｎ Ｊ ＯｓｔｅｏｐｏｒｏｓꎬＯｃｔｏｂｅｒ２０１３ꎬＶｏｌ １９ꎬＮｏ. １０ １０２２ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ ｏｎｌｉｎｅｗｗｗ.ｗａｎｆａｎｇｄａｔｅ.ｃｏｍ.ｃｎ　 ｄｏｉ:１０３９６９/ ｊ.ｉｓｓｎ.１００６￣７１０８ ２０１３ １０００３ 论著 高铁培养环境对小鼠前成骨细胞 ＭＣ３Ｔ３￣Ｅ１增殖、分 化的影响 １ ２ ２ ３ ２∗ 赵国阳　 何银锋 　 李光飞 　 Ｘｉ Ｈａｎｇ 　 徐又佳 １. 江苏大学附属医院骨一科ꎬ镇江　 ２１２００１ ２. 苏州大学附属第二医院骨科ꎬ苏州　 ２１５００４ ３. 美国纽约大学医学院ꎬ美国纽约 中图分类号: Ｒ６８１　 　 文献标识码: Ａ　 　 文章编号: １００６￣７１０８(２０１３) １０￣１０２２￣０４ 摘要: 目的　 观察高铁培养环境下小鼠前成骨样细胞ＭＣ３Ｔ３￣Ｅ１增殖、分化指标的变化趋势ꎬ探讨铁离子对成骨细胞增殖、分 化的影响ꎮ 方法　 小鼠前成骨样细胞ＭＣ３Ｔ３￣Ｅ１在３７℃条件下体外培养ꎬ在１０ ｍｍｏｌ/ Ｌβ￣甘油磷酸和５０ μｇ/ ｍＬ抗坏血酸的 诱导分化的作用下ꎬ分化为成骨细胞ꎬ同时用不同浓度(５０、１００、２００ μｍｏｌ/ Ｌ)枸橼酸铁铵(ＦＡＣ)干预ꎬ用ＭＴＴ法检测细胞的增 殖活性ꎬＲＴ￣ＰＣＲ法检测成骨细胞分化基因成骨相关转录因子(Ｒｕｎｘ２)、锌指结构转录因子(Ｏｓｔｅｒｉｘ)、骨唾液酸蛋白(ＢＳＰ)和 骨钙素(ＯＣ)的表达ꎬ碱性磷酸酶(ＡＬＰ)活性试剂盒检测细胞碱性磷酸酶活性ꎮ 结果　 ＭＣ３Ｔ３￣Ｅ１细胞的增殖活性、成骨分化 相关基因的表达以及ＡＬＰ水平随ＦＡＣ干预浓度的增加呈剂量依赖性降低(Ｐ００５)ꎮ 结论　 高铁培养环境可明显抑制小鼠 前成骨样细胞ＭＣ３Ｔ３￣Ｅ１的增殖和分化ꎮ 关键词: 铁离子ꎻ成骨细胞ꎻ细胞分化 ＥｆｆｅｃｔｏｆｅｘｃｅｓｓｉｒｏｎｃｕｌｔｕｒｉｎｇｏｎｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｏｆｍｏｕｓｅＭＣ３Ｔ３￣Ｅ１ｐｒｅｏｓｔｅｏｂｌａｓｔｓ　 １ ２ ２ ３ ２ ＺＨＡＯ Ｇｕｏｙａｎｇ ꎬＨＥ Ｙｉｎｆｅｎｇ ꎬＬＩ Ｇｕａｎｇｆｅｉ ꎬＸｉ Ｈｕａｎｇ ꎬＸＵ Ｙｏｕｊｉａ １. Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｏｒｔｈｏｐｅｄｉｃｓꎬｔｈｅ Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｊｉａｎｇｓｕ ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬＺｈｅｎｇｊｉａｎｇ２１２００１ꎬＣｈｉｎａꎻ ２. Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｏｒｔｈｏｐｅｄｉｃｓꎬｔｈｅ Ｓｅｃｏｎｄ Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｓｏｏｃｈｏｗ ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬＳｕｚｈｏｕ２１５００４ꎬＣｈｉｎａ ３. Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ ＭｅｄｉｃｉｎｅꎬＮＹＵ Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ ＭｅｄｉｃｉｎｅꎬＮＹ １００１６ꎬＵ.Ｓ.Ａ. Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ:ＸＵ ＹｏｕｊｉａꎬＥｍａｉｌ:ｘｕｙｏｕｊｉａ＠ｍｅｄｍａｉｌ.ｃｏｍ.ｃｎ Ａｂｓｔｒａｃｔ: Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　 ＴｏｏｂｓｅｒｖｅｔｈｅｃｈａｎｇｉｎｇｐａｔｔｅｒｎｏｆｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅａｎｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉａｌｉｎｄｅｘｅｓｏｆｍｏｕｓｅＭＣ３Ｔ３￣Ｅ１ｐｒｅｏｓｔｅｏｂｌａｓｔｓｉｎ ｔｈｅ ｃｕｌｔｕｒｅ ｗｉｔｈ ｅｘｃｅｓｓ ｉｒｏｎꎬ ａｎｄ ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｉｒｏｎ ｏｎ ｔｈｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｏｓｔｅｏｂｌａｓｔｓ. Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｕｓｅ ＭＣ３Ｔ３￣Ｅ１ｐｒｅｏｓｔｅｏｂｌａｓｔｓｗｅｒｅ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ａｔ３７℃ ｉｎｖｉｔｒｏ. Ｕｎｄｅｒｔｈｅｉｎｄｕｃｔｉｏｎｏｆ １０ｍｍｏｌ/ ｌ β￣ｇｌｙｃｅｒｏｐｈｏｓｐｈａｔｅａｎｄ５０μｇ/ ｍｌ Ｌ￣ ａｓｃｏｒｂｉｃ ａｃｉｄꎬＭＣ３Ｔ３￣Ｅ１ｐｒｅｏｓｔｅｏｂｌａｓｔｓｄｉｆ