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毛白杨叶绿体基因启动子和终止子的克隆及其功能鉴定_张发云
农业生物技术学报 JournalofAgriculturalBiotechnology 2007,15 (3):439~445
·研究论文·
毛白杨叶绿体基因启动子和终止子的克隆及其功能鉴定*
1,2,3 2 2
** ** ***
张发云 ,尹维波 ,胡赞民
(1. 100093
中国科学院植物研究所光合作用研究中心,北京 ;
2. 1001013. 100049)
中国科学院遗传与发育生物学研究所,北京 ;中国科学院研究生院,北京
(Populustomentosa) DNA PCR psbA
摘要:从毛白杨 组培苗中提取基因组总 ,用 方法克隆了包含 基因启动子、终止子和
16SrRNA DNA PrrnPpsbA TpsbA Nicotiana
基因启动子的叶绿体 序列,并在此基础上克隆了启动子 、 及终止子 。与烟草(
tabacum) 35 10
叶绿体基因组相关同源序列比较结果表明,这两种启动子中,起重要作用的调控序列元件,如 – 区、– 区以及翻
Prrn rbcL RBS
译调控序列等是高度保守的。利用叶绿体基因启动子的原核表达特性,用启动子 (其后添加 基因的 序列及突变
RBSm PpsbA TpsbA GFP pSGmTpSmGmT pPGmT T7
的 序列)和 及终止子 分别构建了 基因的原核表达载体 、 和 ,并以 启动
pETGm EscherichiacoliBL21
子为对照(载体 ),以大肠杆菌( ) 为宿主菌进行了初步的原核表达实验。检测结果表明,克隆到的
叶绿体基因启动子PpsbA Prrn BL21 RNA
与 具有生物学功能,其转录活性主要受大肠杆菌 本身的 聚合酶的调控,所控制的
GFP T7RNA T7 RBS
是组成型表达的; 聚合酶对其有一定的作用,但比对 启动子的作用弱。核糖体结合位点(
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