血液DNA提取及PCR扩增 - 中国医科大学网站.pptVIP

分子流行病学实验 经典DNA提取法 1.在弱碱和螯合剂的条件下行组织匀浆，溶解胞、核膜。 2.去垢剂（SDS）与蛋白酶消化蛋白，分离DNA。 3.有机溶剂（酚与氯仿）去除蛋白，萃取DNA。 4.乙醇与盐类沉淀DNA。 1.样品处理：分离细胞，低渗盐水（0.2%）或细胞悬浮液。（10mmol/L Tris-HClpH8.0,0.1mol/LEDTA,20mg/ml胰RNA酶,0.5%SDS）。 2.消 化：TNE缓冲液 （15mmol/L Tris-HClpH8.0,15mmol/LEDTA, 5mmol/L NaCl）4ml，10%SDS0.45 ml，10mg/ml蛋白酶K（终浓度，100μg/ml），混匀，50℃3h，45℃过夜。 3.DNA 分离：等体积饱和酚；等体积饱和酚/氯仿/异戊醇（25/24/1）；氯仿/异戊醇（24/1）。500r/min,10min。 4.沉淀 DNA：1/10体积3mol/L NaAc，2倍无水乙醇-70%乙醇。离心，挥干。可加醋酸钠（终浓度：0.3mol/L）并低温。10-20分钟。 5.溶解DNA：适量TE（10mmol/L Tris-HClpH8.0,1mmol/LEDTA）,长时间。 1.Chelex-100提取DNA 基本成分：含有亚氨基二乙酸盐离子的苯乙烯-二乙基苯 共聚物。 基本方法：沉淀细胞；5%试剂200μ