植物生物学实验(二)-南京师范大学精品课程.ppt

实验三、叶绿体色素的提取、分离与性质分析 植物生物学实验(二) 植物生理学基础与综合实验 南京师范大学生命科学学院 一、实验目的 掌握叶绿体色素的提取方法； 掌握纸层析法分离叶绿体色素的原理和步骤； 掌握叶绿体色素的部分理化性质。 二、实验原理 （一）叶绿体色素： 1.叶绿素 2.类胡萝卜素 叶绿素a 叶绿素b 胡萝卜素 叶黄素 3:1 (阳生) ２:1 (阴生) 2：1 3：1 叶绿素a、b的结构式 类胡萝卜素的结构式 （二）四种色素的化学性质 均为亲脂性亲水性， ∴均不溶于水，而溶于有机溶剂，故可用乙醇、丙酮等有机溶剂提取。 极性大小： 叶绿素b叶绿素a叶黄素胡萝卜素。 ∴根据相似相溶原理，在有机溶液中的溶解度： 叶绿素b叶绿素a 叶黄素胡萝卜素。 叶绿素的卟啉环： 叶绿素分子头部的金属卟啉环中心均为Mg2+。 在弱酸作用下，叶绿素分子中的镁可被H + 取代而形成褐色的去镁叶绿素，后者遇铜则可形成绿色的铜代叶绿素。 铜代叶绿素很稳定，在光下不易被破坏，故常用此法制做植物的原色标本。 （二）叶绿素的光学性质 叶绿素的吸收光谱 叶绿素的荧光现象 荧光现象： 叶绿素溶液在透射光下呈绿色，而反射光下呈红色的现象。 荧光现象的原理 反射光能量入射光 ∴波长入射光 类胡萝卜素的吸收光谱 三、材料与试剂 新鲜的植物叶片。 丙酮、CaCO3、醋酸铜结晶、浓盐酸。 量筒，新华滤纸，大培养皿一只，结晶皿或小培养皿一只，长滴管，剪刀。 四、操作步骤 1，叶绿体色素提取： 叶片擦净，去中脉后取 4g剪碎，加少许碳酸钙和石英砂，再分次加入10mL丙酮研磨，过滤，滤液即为色素提取液。 1 2 3 4 5 2、叶绿体色素的分离——（纸层析法） 惰性支持物：滤纸； 固定相：水； 流动相：丙酮-汽油推进剂（v：v=3：10） 1）准备 卷纸芯： 长滤纸条，宽度=大培养皿高度-小培养皿高度。 取一张圆形大滤纸，中心穿孔，将纸芯插入，一端与纸面平齐； 2）点样 用一支长滴管在纸芯插入圆滤纸的一端点样； 纸芯插入小培养皿（内加少量丙酮-汽油推进剂），点样端朝上，加盖，展层； 层析至前沿接近纸边缘。 立即用铅笔标出各层与位置。 3）层析 成分1 成分2 成分3 成分4 标明各层成分名称和判断依据。 3、叶绿素提取液荧光现象观察 取叶绿体色素提取液少许于试管中； 从与入射光垂直的方向观察； 再在透射光方向观察叶绿体色素溶液的颜色； 记录叶绿素体色素溶液颜色有何不同 ，分析原因。 4、铜代叶绿素反应 向叶绿素溶液中逐滴加入浓盐酸，并不断摇匀，至颜色变化，观察并记录现象； 向变色后的叶绿素溶液中加入少量醋酸铜，并在酒精灯上缓缓加热，观察并记录颜色的变化。 记录现象，并分析原因。 五、思考题： 1. 用不含水的有机溶剂如无水乙醇、无水丙酮等提取干燥材料中的叶绿体色素，结果会如何？为什么？ 　　２．研磨提取叶绿素时，为何要加入CaCO3？ 　　３．画图说明叶绿体色素纸层析结果，并解释原因。 　　４．铜在叶绿素分子中具有替代镁的作用，这有何实用意义？