小麦成熟胚离体培养研究.docVIP

　　小麦成熟胚离体培养研究 　摘要：以美国小麦品种Overley成熟胚作为外植体进行离体培养，研究外源激素对小麦成熟胚诱导愈伤组织、分化出苗以及试管苗增殖的影响。试验结果表明，在MS培养基中添加2,4-D 3 mgL-1愈伤组织诱导频率较高，成愈率为84.0%；在添加有KT 2~3 mgL-1的MS分化培养基中愈伤组织分化率较高，可达85%以上；将试管苗转接至添加0.2 mgL-1的NAA和0.5~2.0 mgL-1的6-BA的培养基中，试管苗有一定的分化增殖，但最高分化率仅为33.3%，增殖系数2.05。 　　关键词：小麦；成熟胚；离体培养；植株再生 　　　Study on Mature ature bryos of Overley um medium for callus induction gL-1）, the rate of callus formation edium for callus differentiation gL-1）, the differentiation of callus ore than 85%. The ultiplication coefficient in MS+NAA（0.2 mgL-1）+6-BA（0.5~2.0 mgL-1）, ature embryo; in vitro culture; plant regeneration 　　 　　目前，随着生物技术的发展，利用生物技术方法改良小麦品种资源越来越受到重视。幼胚被许多研究者认为是用于小麦离体培养最有效的转化受体，被广泛用于体细胞无性系变异与基因遗传转化的研究，但幼胚的培养会受到季节、时间等限制，且难以重复试验[1-2]；而小麦成熟胚具有良好的再生能力，具有种子保存期长、易获得、取材方便、操作简单、试验周期短、成愈率高、愈伤组织成长快、一次成苗率高等优点，有助于解决以上的问题。 　　有关小麦成熟胚培养研究的报道中，愈伤组织的诱导及分化频率的问题仍在探讨，进一步改善成熟胚供体小麦种子的生理状态，优化多种培养条件，提高胚性愈伤组织的形成能力，仍然是目前小麦成熟胚培养面临的主要问题。因此，研究成熟胚组织培养的影响因素，并优化培养条件是提高小麦成熟胚离体培养效率的关键。 　　 　　1 材料和方法 　　 　　1.1材料 　　供试材为当年产美国堪萨斯州立大学引进的冬小麦品种Overley，选取籽粒饱满、大小均匀一致的种子，取其胚作为培养材料。 　　1.2方法 　　1.2.1 愈伤组织诱导将小麦种子用清水冲洗净，浸种24 h后备接种用。预处理后的小麦种子用75%的酒精浸泡30 s，然后用0.1%的升汞浸泡10 min，无菌水冲洗3～5遍。剥取小麦种子的成熟胚，接种于添加不同浓度2,4-D（1,3,5,7 mgL-1）的MS固体培养基（蔗糖20 gL-1）中进行愈伤组织的诱导。每处理接种50枚，重复3次。 　　1.2.2 分化培养取愈伤组织接种到分化培养基中，共设计7种激素处理，分别为：MS+6-BA 0.5 mgL-1，MS+6-BA 1 mgL-1，MS+6-BA 2 mgL-1，MS+6-BA 3 mgL-1，MS+KT1 mgL-1，MS+KT 2 mgL-1，MS+KT 3 mgL-1，每种培养基中添加蔗糖15 gL-1。 　　1.2.3试管苗的增殖培养诱导出苗培养30 d后，当试管苗生长到3～5 cm左右进行增殖培养，增殖培养基为MS＋NAA 0.2 mgL-1＋6-BA（0.5，1.0，1.5，2.0 mgL-1）+蔗糖15 gL-1+琼脂6.4 gL-1，pH 5.8。 　　1.2.4培养条件每日光照12 h，光照强度约为2 000 lx，室温（25plusmn;2） ℃。 　　 　　2结果与分析 　　 　　2.1不同浓度2,4-D对小麦成熟胚愈伤组织诱导的影响 　　将小麦成熟种子的胚剥离，接种到添加有4种浓度2,4-D的MS培养基中，培养4～5 d后开始形成愈伤组织，部分成熟胚发生了发芽现象。培养20～30 d后，愈伤组织块生长可达4～8 mm。由表1可以看出，不同浓度的2,4-D对小麦成熟胚产生愈伤组织的诱导效果不同，当培养基中添加2,4-D的浓度为3 mgL-1时，成愈率可达84.0%；浓度为1 mgL-1时的诱导效果较差，成愈率仅为74.0%；而当2,4-D浓度大于3 mgL-1时成愈率随浓度升高呈下降趋势。说明，在较低浓度的2,4-D作用下愈伤组织的增殖速度较快，浓度过高增殖速度下降。 　　2.2不同激素种类与浓度对愈伤组织分化的影响 　　将小麦成熟胚愈伤组织转接到添加有不同浓度KT和6-BA的MS分化培养基中，经过10 d左右愈伤组织上开始出现绿色的芽点，继而从芽点处分化出芽