尼莫地平对阿糖胞苷诱导HL60细胞凋亡机制影响的研究.docVIP

　　尼莫地平对阿糖胞苷诱导HL60细胞凋亡机制影响的研究 【摘要】 为了 研究 尼莫地平对阿糖胞苷诱导HL60细胞凋亡机制的 影响 ，采用琼脂糖凝胶电泳检测其DNA凋亡带，用细胞免疫组织化学 方法 检测细胞凋亡相关基因bcl2、bax的蛋白表达。结果表明，实验组自培养8小时起琼脂糖凝胶电泳显示典型的DNA梯形凋亡带。Bcl2蛋白表达在各实验组随培养时间延长逐渐下降，而Bax蛋白的表达则逐渐增加，Bcl2/Bax比值逐渐下降，8小时就与对照组出现差异（Plt;0.05）。结论：尼莫地平及阿糖胞苷均能促进HL60细胞凋亡，诱导其凋亡的机制与下调bcl2及上调bax基因的蛋白表达有关。尼莫地平能加强阿糖胞苷促进HL60细胞凋亡，其机制与协同下调bcl2的表达有关。 【关键词】 尼莫地平 阿糖胞苷 凋亡 HL60细胞系 蛋白表达 Bcl2 Bax Effect of Nimodipine on Mechanisms of HL60 Cell Apoptosis Induced by Cytarabine Abstract The aim echanisms of HL60 cell apoptosis induced by nimodipine (NMDP ) and cytarabine (AraC). The DNA fragment munohistochemistry. The results shoental groups pared ental groups than that in the control group, ental groups than that in the control group. It is concluded that NMDP and AraC induce apoptosis of HL60 cells, and the mechanism of apoptosis induced by them may doechanism of HL60 cell apoptosis induced by AraC and NMDP is probably associated odipine; cytarabine; apoptosis; HL60 cell line; protein expression; Bcl2; Bax 白血病多药耐药性(MDR)的产生是导致化疗失败的一个主要原因［1],凋亡相关基因bcl2、bax的表达与白血病耐药之间有着密切关系［2]。bcl2表达增高能使白血病细胞抵抗糖皮质激素、VP16、DNR、MIT、AraC、VCR、ADM和ATRA等化疗药物及X射线所诱导的凋亡， bax是调节bcl2肿瘤耐药的重要基因之一［3］。研究表明，钙通道拮抗剂尼莫地平(nimodipine, NMDP) 通过加强化疗药物诱导细胞凋亡而达到化疗增强作用［4、5］。NMDP是如何加强化疗药物诱导细胞凋亡的？其作用机制尚不明了。为此，本研究以人类早幼粒细胞白血病细胞株（HL60）为研究对象，探讨尼莫地平对阿糖胞苷诱导HL60细胞凋亡机制的影响，为临床合理用药提供 理论 依据。 材料和方法 细胞和主要试剂 HL60细胞株引自武汉大学典型培养物保藏中心。NMDP购来自德国拜尔公司，AraC购自上海华联制药厂。Rabbit AntiBcl2、Rabbit AntiBax、SABC试剂盒、DAB显色试剂盒均购自武汉Boster公司。基因组DNA抽提试剂盒购自上海生物工程有限公司，DNA 电泳marker购自TaKaRa公司。 细胞培养和分组 HL60细胞在含有10%新生牛血清的RPMI 1640培养液中悬浮培养。每2-3天传代1次。实验前调整细胞浓度为5×105/ml。实验时将对数期生长细胞分为4组。A组： 对照组（HL60组）； B组：HL60+ NMDP（0.01 mg/ml）组； C组：HL60+ Arac(0.05 mg/ml)组； D组：HL60+NMDP+Arac组。细胞分别培养0、8、16、24小时。 DNA琼脂糖凝胶电泳观察DNA梯形条带。取不同培养时间的HL60细胞各1.5×106个，按照DNA抽提试剂盒的说明提取DNA，用冷乙醇洗涤2次，最后在 2.5%的琼脂糖凝胶块上于4 V/cm条件下，电泳1小时，紫外灯下观察DNA电泳条带。 凋亡调节基因检测 Bcl2蛋白表达 取不同培养时间的HL60细胞各1×106个，离心，涂片，干燥，丙酮固定30分钟。浸泡于1份30% H2O2和50份甲醇的混合液中30分钟，然后加入pH 7.8的0.1%胰酶液中37℃消化10分钟，用PB