染料木素的体外抗肿瘤作用研究.docVIP

　　染料木素的体外抗肿瘤作用研究 作者：戴支凯，黄姣娥，余丽梅，徐庆 【摘要】 　　目的观察染料木素的体外抗肿瘤作用。方法采用溴化3-（4，5-二甲基噻唑-2）-2，5-二苯基四氮唑(3-［4,5- dimethylthiazol-2-yl］ -2,5-diphenyltetrazolium bromide, MTT)检测法测定染料木素对子宫内膜腺癌细胞系（JEC）、人肝癌SMMC-7721细胞系体外增殖的影响，按台盼蓝排染法计数活细胞，绘制细胞生长曲线。结果MTT法检测显示，染料木素对JEC细胞和SMMC-7721细胞增殖的抑制作用呈现剂量和时间依赖性；随染料木素浓度的升高，JEC和SMMC-7721细胞的生长曲线逐渐下移，10-4 mol· L-1的染料木素作用下的JEC细胞生长曲线呈现与5Fu相似的下降趋势。结论染料木素具有一定的抗肿瘤作用。 【关键词】 染料木素 肿瘤 细胞生长 　　Abstract:ObjectiveTo investigate the antitumor effects of genistEin on gastric carcinoma cell lines JEC and SMMC-7721 cells in vitro. MethodsCell validity of genistEIn on JEC and SMMC-7721 cells easured by MTT reduction test. The number of living cells ethod and groe-dependent in MTT reduction test. Grool· L-1 tended to decline gradually and ilar to that of 5Fu. ConclusionGenistein has certain anticancer effect. 　　Key a; Cell grol－1的细胞悬液，每个培养瓶2 ml，置３７℃、５％ 的CO2环境中进行体外培养，待瘤细胞在培养瓶底长至约８０％ 细胞融合时，分瓶传代培养。 　　1.1.2 分组实验分为空白对照组（NS）、阳性对照组（5-fliorouracil，5Fu，10-4mol·L-1。上海旭东海普药业有限公司，批号：031001），5个10倍梯度的试药组（10-4～10-8 mol· L-1的染料木素，﹥95%，陕西赛德高科生物股份有限公司）和与10-4 mol· L-1的染料木素相对应的溶媒对照组（含0.5%乙醇的NS）。 　　1.1.3 操作用RPMI-1640完全培养液分别将肿瘤细胞稀释配制成5×104· ml－1的细胞悬液，接种于96 孔培养板，每孔100 μl，置37℃,5% 的CO2 环境中，进行体外培养，24 h后加药，每孔10 μl，设5个平行孔，空白对照组加入等量生理盐水；结束培养（24，48，72，96 h）前4 h，每孔加入5 mg· ml－1的MTT溶液10 μl，结束培养后小心吸弃上清液，每孔加入DMSO 150 μl，待甲臢完全溶解后于酶标仪（Sunrise, Australia）570 nm处读出各孔的OD值。实验重复3次。 　　1.1.4 评价指标评价指标为平均细胞抑制率(IR)。细胞抑制率（%）=(1一实验孔OD值/对照孔OD值) ×100％。IRgt;50％为敏感，在30％～50％为低度敏感，小于30％为不敏感。 　　1.2 台盼蓝排染法及生长曲线的绘制将对数生长期细胞制成浓度为5×104· ml－1细胞悬液，接种于24 孔板，每孔1 ml。置37℃,5%的CO2 环境中培养24 h，再行无血清培养48 h。更换完全培养基，每孔加入药物100 μl（空白对照组加等体积的生理盐水），每组各时间点均设2个平行孔。分别于药物作用1～7 d，消化收集细胞，按台盼蓝排染法，用血细胞计数板在光镜下计数活细胞数。以时间为横坐标，活细胞数为纵坐标，绘制细胞生长曲线。 　　1.3 统计学处理实验所得数据用±s表示，采用t检验进行各组间比较。 　　 2 结果 　　2.1 MTT检测 　　2.1.1 染料木素对JEC细胞体外增殖的影响MTT检测结果显示，随染料木素浓度的增加和时间的延长，染料木素对JEC细胞生长的抑制作用逐渐增强。结果见表1。其中，10-4 mol· L-1的染料木素作用JEC细胞24，48，72和96 h的抑制百分率分别为36.10%，55.00%，58.73%和62.21%，与5Fu间无显著差异（Pgt;0.05）。表1 染料木素对JEC细胞体外增殖的影响(略) 　　2.1.2 染料木素对SMMC-7721细胞体外增殖的影响MTT检测结果显示，随着染料木素浓