20131015SDS-PAGE测定蛋白质分子量辩析.ppt

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2017-05-09 发布于湖北
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20131015SDS-PAGE测定蛋白质分子量辩析.ppt

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SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质分子量;一目的要求;二原理;SDS带有大量的负电荷，与蛋白结合时，使之都带上相同密度的负电荷，掩盖了蛋白间电荷的差异 ;SDS与蛋白结合后，引起蛋白构象的改变，为近似雪茄烟的长椭圆形，短轴相同，长轴与分子量成正比迁移率只有分子量有关 ;在不连续电泳中: 电荷效应浓缩效应分子筛效应在连续电泳中: 电荷效应分子筛效应在SDS中: 分子筛效应; SDS有连续体系和不连续体系两种两种体系有各自的样品溶解液及缓冲液，但加样方式，电泳过程及固定、染色与脱色方法完全相同。;三试剂与器材;连续体系SDS有关试剂;三试剂与器材;四操作方法;配制7.5%的分离胶（20ml）;四操作方法;四操作方法;四操作方法;注意事项;凝胶浓度T%=(a+b)/m T值与样品分子量及孔径有关交联度C%=b/(a+b) 经验公式：C=6.5-0.3T a/b（w/w）值与凝胶的性能有关 a：丙烯酰胺克数； b：甲撑双丙烯酰胺克数；m：缓冲液体积（毫升） ;实验报告;各种试剂的作用;;四操作方法