第九章 发酵设备和代表性发酵产品工艺过程 精要.ppt

⑶连续管道发酵器 连续管道发酵器有多种多样，可以是直管也可以是蛇管。培养液和种子液不断流入发酵器进行发酵。 连续管道发酵器主要用于厌氧发酵。 种子罐 管道发酵器 培养液 种子液 * 一般认为50L以下的是实验室发酵罐； 50-5000L是中试发酵罐； 5000L以上是生产规模的发酵罐。 3．按容积分类： 第一节 发酵设备 小试机械搅拌通气式发酵罐（实验室用，1L-50L） 中试机械搅拌通气式发酵罐（50L-5000L） ⑴青霉素 又被称为青霉素G、青霉素钠、苄青霉素钠、青霉素钾、苄青霉素钾等。 青霉素 －CH2－C－NH－ O O N COOH CH3 CH3 S 氨苄青霉素 －CH－C－NH－ O O N COOH CH3 CH3 S NH2 第二节 代表性发酵产品生产工艺过程 青霉素的理化性质 1、稳定性 固体青霉素盐的稳定性与其含水量和纯度有很大的关系. 2、溶解度 青霉素游离酸在水中溶解度很小，易溶于有机溶剂如醋酸乙酯、苯、氯仿、丙酮和乙醚中，而其钾盐、钠盐易溶于水和甲醇，可溶于乙醇。 3、降解反应 青霉素是很不稳定的化合物，遇酸碱或加热易分解而失去活性，并发生分子重排。 4、紫外吸收 5、过敏反应 青霉素发酵工艺 1.发酵工艺流程 （1）菌种 （a）最早发现的产生青霉素的原始菌种是点青霉菌，生产能力很低，不能满足工业生产要求，所以被淘汰。现在主要采用的是产黄青霉菌。 （b）为了提高产黄青霉的青霉素产量使用的诱变剂如：二环氧丁烷、甲磺酸乙酯、乙烯亚胺、亚硝酸、X射线等。 （2）孢子制备 将沙土孢子先在用甘油、葡萄糖、蛋白胨组成的培养基进行斜面培养，经传代活化。最适生长温度25~26oC，培养6~8天，得单菌落，再传斜面，培养7天，制得斜面孢子。再移植到优质小米或大米固体培养基上，25oC，相对湿度45%-50%，生长7天，制得小米孢子。孢子成熟后进行真空干燥，低温保存备用。 （3）种子罐培养工艺 一级种子发酵：发芽罐，孢子萌发，形成菌丝。 培养基：葡萄糖，玉米浆，碳酸钙，玉米油,消沫剂等； 接种量：200亿孢子/t培养基 空气流量：1：3（m3/ m3·min）； 搅拌转速：300-350r/min； pH：自然； 温度：27±1℃； 时间：40h。 二级种子罐：繁殖罐，大量繁殖。 培养基：葡萄糖、玉米浆，玉米油，消沫剂等； 接种量：10％； 空气流量：1:1-1.5 （m3/ m3·min）； 搅拌转速：250-280r/min； pH：自然； 温度：25±1℃； 时间：10-14h； （4）生产罐培养工艺 三级罐：生产罐； 培养基：花生饼粉，葡萄糖，尿素，硝酸铵，硫代硫酸钠，苯乙酰胺，CaCO3, 玉米油，硅油. 温度控制 变温控制：不同阶段不同温度。 生长阶段：较高温度，缩短生长时间；生产阶段适当降低温度，以利于青霉素合成。前期控制26℃左右，后期降温控制22℃。 pH控制 合成适宜pH6.4－6.6左右，避免超过7.0直接加酸或碱： 自动控制流加葡萄糖：恒速；变速，依赖pH变化快慢。 pH下降：补加CaCO3、通氨、尿素或提高通气量 pH上升：补加糖、生理酸性物质（硫酸铵、油脂）恒速补糖，用酸或碱控制方式。 根据pH补糖变温控制： 溶氧控制 ＜30％饱和度，产率急剧下降； ＜10％，造成不可逆的损害。 临界溶氧浓度：30％。 通气比：1:0.8－1.5 vvm。 适宜的搅拌速度：保证气液混合，提高溶氧。 菌丝生长速度与形态、浓度 发酵稳定期，湿菌浓度可达15%~20%，丝状菌干重约3%，球状菌干重在5%左右。在发酵中后期一般每天放一次，每次放掉总发酵液的10%左右。 消泡 天然油脂：玉米油； 化学消沫剂：泡敌。 前期：主间歇搅拌，少加油 中期：搅拌、加油、稍微降低通气量（必要时） 策略：少量多次。 后期：尽量少加消沫剂。 二、提炼工艺过程 在提炼过程中要遵循下面四个原则： 1、时间短 2、温度低 3、pH适中 4、勤清洗消毒 （1）预处理 青霉素的存在部位：发酵液 浓度较低：10－30Kg/m3 含有大量杂质：菌体细胞、核酸、杂蛋白质、细胞壁多糖等、残留的培养基、色素、盐离子、代谢产物等 目的：浓缩目的产物，去除大部分杂质，改变发酵液的流变学特征，利于后续的分离纯化过程。 预处理：发酵液加少量絮凝剂沉淀蛋白。 （2）过滤 鼓式真空过滤机过滤： 一次滤液：pH6.2-7.2，略浑，棕黄或绿色，蛋白质含量0. 5-2.0%。 板框式过滤机过滤：硫酸调节pH4.5-5.0，加入0.07%溴代十五烷吡啶，0.07%硅藻土为助虑剂。 二次滤液：澄清透明，用于提取（收率90％） （3）溶剂萃取 原理：青霉素游离酸易溶于有机溶剂，