海帕西啶的保守性分析.docVIP

　　海帕西啶的保守性分析 【摘 要】 目的 比较不同物种海帕西啶的保守性，从而确定它们之间的联系。 方法 应用 氨基酸多重 分析 软件Clustalethods Use analysis softong mammals and it is same among fish. Hepcidin conservation is midest among species. Conclusion Hepcidin is an antimicrobial peptide in fish and possesses iron metabolism regulated function in mammals. Variance of hepcidin amino acid can explain cause of hepcidin function difference. 　【Key icrobial peptide；Conservation 海帕西啶（hepcidin）是2000年才发现的一种抗微生物小肽［1］，和其他抗菌肽类似富含半胱氨酸，有趣的是2001年发现海帕西啶还是一种重要的铁内稳态负调节因子，对于保持哺乳动物体内的铁平衡具有重要作用。海帕西啶铁代谢调节作用的发现使 研究 重点发生转移，现在已经确定海帕西啶表达过多或过少均造成铁代谢紊乱，如海帕西啶不足易造成血色素沉着，而海帕西啶过量又导致了炎症性贫血［2］，这些研究为海帕西啶的广泛应用提供了 理论 基础。海帕西啶首先表达出80多个氨基酸的前体蛋白，经过加工最终生成含20～25个氨基酸的成熟小肽， 目前 在多种鱼类和哺乳动物中克隆成功，并且发现它们的半胱氨酸高度保守，而对于其他氨基酸的保守情况还未全面阐述，本文通过对海帕西啶氨基酸序列比较来探究它们之间的内部联系。 1 材料和方法 1.1 材料 所有海帕西啶氨基酸序列从Genebank获取，共13个物种的海帕西啶，基本情况见表1。表1 海帕西啶前体蛋白基本情况　 　1.2 方法 氨基酸多重序列比对使用ClustalW1.8软件进行［3］。 2 结果 2.1 不同物种海帕西啶前体的差异 从海帕西啶前体氨基酸数目看，变异不大，哺乳动物在82～85，而鱼类集中在73～91，但大部分都在85个氨基酸左右。成熟海帕西啶氨基酸数目更为恒定，以20和25个氨基酸最为常见，由于海帕西啶功能以成熟蛋白为基础，因此只分析成熟海帕西啶之间氨基酸的保守性。 2.2 鱼类和哺乳动物海帕西啶保守性 对鱼类和哺乳动物海帕西啶首先分为两组进行比较，结果见表2和表3。表2 鱼类成熟海帕西啶氨基酸保守性 注：*代表高度保守； :表示相对保守（下同）通过比对得出鱼类海帕西啶保守氨基酸为：CXFCCXCCXXXXXCGXCCRF（X代表任意氨基酸，下同）。 表3 哺乳动物成熟海帕西啶氨基酸保守性 通过比对得出哺乳动物海帕西啶保守氨基酸为：DTNFPICLFCCXCCKXSXCGLCCXT。 2.3 鱼类和哺乳动物之间海帕西啶保守性 对鱼类和哺乳动物海帕西啶再进行比较，得出保守氨基酸为：XCXFCCXCCXXXXXCGXCCXX。 3 讨论 　海帕西啶是近期发现的一种重要抗菌肽，它富含半胱氨酸，并且相对一般抗菌肽有两点独特之处，第一半胱氨酸含量更高更保守，20或25个成熟海帕西啶中占据8个（达到32%～40%）；第二还是一种铁代谢调节激素，对于哺乳动物铁内稳态保持发挥重要作用，引起 研究 人员浓厚兴趣，成为当前研究热点［4］。海帕西啶序列 分析 表明其氨基酸保守性较高，其中8个半胱氨酸在位置上高度保守，说明它们参与形成的二硫键对蛋白质功能有重要意义，鱼类有12个保守氨基酸占总数（21个）的50%以上，而哺乳动物更是高达84%（25个氨基酸中有21个保守）。但哺乳动物和鱼类之间海帕西啶保守性上存在明显差异，两者只有10个氨基酸保守，其中半胱氨酸占了8个，此外还有1个甘氨酸和1个苯丙氨酸，这些保守氨基酸暗示它们参与了抗菌作用。通过对哺乳动物和鱼类（鲈鱼［5］）海帕西啶空间结构的研究发现，它们基本结构类似，都是反平行β折叠，二硫键维持了整体空间结构，因此这个结构是海帕西啶发挥抗菌作用的基础。但哺乳动物海帕西啶空间结构和鱼类的差异可能暗示海帕西啶的铁代谢调节作用。结合这些事实可以认为海帕西啶在早期主要参与先天性免疫，而随着进化在哺乳动物中又参与了铁代谢调节，由于哺乳动物免疫系统完善，因此铁代谢成为重要调节目标。至今已发现存在海帕西啶的5个物种中，只有小鼠存在两个亚型，第二亚型不具备铁代谢作用［6］，可能的解释是该亚型保留了低等生物的一些痕迹。通过海帕西啶氨基酸保守性分析可以得出保守的半胱氨酸及整体的反平行β折叠结构是海帕西啶抗菌作用的基础，而哺乳动物其他保守氨基