载体表达siRNA抑制HBV复制与基因表达.pdf

( ) 第 52 卷 第 4 期 武汉大学学报 理学版 Vol . 52 No . 4 　 　2006 年 8 月 J . Wuhan U niv . (Nat . Sci . Ed . ) Aug . 2006 ,466～470 文章编号 :167 18836 (2006) 载体表达 si RNA 抑制 HBV 复制与基因表达 吴 　浩 , 邬开朗 , 朱 　应 , 吴建国, 杨复华 (武汉大学 生命科学学院/ 病毒学国家重点实验室 ,湖北 武汉 430072) ( ) 　　摘 　要 : 用载体表达 siRNA 的方法并通过 RNA 干扰达到抑制乙型肝炎病毒 HBV 的复制及其基因的表达. 针 对 HBV 的 S 基因选取 4 个靶位点 ,并将 目的基因与荧光素酶报道基因构成快速筛选系统 ,从 4 个位点中筛选到一个 有效的作用位点. 用半定量 R TPCR 、EL ISA 、Western blot 和荧光定量 PCR 等方法对筛选到的有效位点进行了验证 , 结果表明,siRNA 成功降解了 HBV S 基因的mRNA ,降低了 S 蛋白的表达水平 ,有效地抑制了 HBV 的复制. 关 　键 　词 : RN A 干扰 ; 小分子干扰 RN A ; 乙型肝炎病毒 中图分类号 : Q 939 . 47 　　　文献标识码 :A 术有望克服上述困难. 本研究即通过 自行构建能在 0 　引　言 细胞内转录出功能性 si RN A 的载体 ,并将其用于干 扰乙肝病毒 S 基因的表达和病毒复制 ,为下一步基 　　据统计 ,全世界大约有 3 . 5 亿 乙型肝炎病毒 因功能和治疗手段的研究奠定了基础. ( HBV) 慢性感染者. 乙型肝炎病毒的长期存在 ,可 以导致肝细胞持续损害和肝纤维化 ,甚至发展为肝 硬化 、肝癌[ 1] . 过去的20 年中 ,虽然疫苗计划免疫降 1 　材料与方法 低了急性 、慢性乙肝病毒感染的发生率 ,一些抗病毒 1 . 1 　材料 药物的合理应用也使很大一部分患者的病情得以控 制[2 ] ,但是 ,抗 HBV 治疗 , 阻断肝细胞内肝炎病毒 Bel7402 和 Hep G2 . 2 . 15 细胞由中国典型培养 基因的复制和表达 ,仍是 目前难题之一. 物保藏中心提供. Hep G2 . 2 . 15 细胞是其基因组上 ( ) 整合了头尾相连的 HBV 全基因组序列 Hep G2 细 RN A 干扰 RN A int erf erence , RN Ai 是指 内 源性或外源性双链 RN A ( d sRN A ) 介导的细胞 内 胞系 ,Bel7402 为肝癌细胞系. mRN A 发生特异性降解 ,从而导致靶基因的表达沉 si RN A 表达载体 H 1p GEM 、荧光素酶报道基