细辛不同提取部位镇痛作用及毒性的比较研究.docVIP

　　细辛不同提取部位镇痛作用及毒性的比较研究 【摘要】 　　目的探讨细辛不同提取部位的镇痛和急性毒性作用。方法采用系统溶剂法提取分离得到4个部位,通过冰醋酸化学致痛和热刺激复制小鼠疼痛模型,对细辛的石油醚提取物、醋酸乙酯提取物、正丁醇提取物及水提取物的镇痛作用进行了研究，且采用灌胃法观察其各提取部位急性毒性反应1周，并观察细辛醇提液不同极性部位的小鼠半数致死量(LD50)，采用Bliss法测定LD50。结果细辛醋酸乙酯提取物0.020 7 g/kg剂量能显著抑制冰醋酸所致小鼠扭体反应和热板刺激, 测得石油醚部位LD50为（1.021 5±0.148 5）g/kg, 醋酸乙酯部位LD50为（0.124 5±0.019 5）g/kg，正丁醇和水相部位未能测出LD50,按最大耐受量方法测定，测得0.56 g的正丁醇部位用药量是20 g体重小鼠的最大耐受量, 0.8 g的水相部位用药量是20 g小鼠的最大耐受量。结论细辛醋酸乙酯提取物具有显著镇痛作用,同时也有较强的急性毒性作用;提示细辛的主要有效成分可能在醋酸乙酯提取物部分,其毒性成分和有效物质可能为同一类物质。 【关键词】 细辛 镇痛作用 急性毒性 细辛(Asarum),又名小辛、细草、辽细辛,为马兜铃科植物的干燥全草，性味辛、温，具祛风散寒、通窍止痛、温肺化饮功效。主要成分含挥发油,油中含丁香油酚甲醚、优藏茴香酮、大黄樟醚、β－蒎烯、细辛醚、细辛酮。另含N-异丁基十二碳四烯胺及消旋去甲乌药碱等。细辛有镇痛、镇静、中枢抑制、局部麻醉等多种药理作用［1,2］。早期的研究主要集中于挥发油,除了挥发油外其它成分是否还具有作用,目前未见系统研究报道。本课题组利用不同极性溶媒对细辛的主要化学成分进行了初步提取、分离,并在此基础上运用化学法诱导动物疼痛及物理法致痛等模型,探讨了细辛不同提取物的镇痛作用及急性毒性作用。现将有关研究结果报道如下。 　 　1 材料与仪器 　　1.1 药品和试剂细辛，购于宜昌市中心 医院 药房，经专家鉴定为马兜铃科植物的干燥全草；阿司匹林(河北康泰药业有限公司)；95%乙醇(武汉化工厂,化学纯) 、石油醚、醋酸乙酯、正丁醇(天津博迪化学试剂分析纯)；水为蒸馏水。 　　1.2 动物健康昆明种小鼠，SPF级小鼠,体重20 ～23 g,生产合格证号为: SCXK (鄂)2003－2005 ,由湖北省疾控中心提供。 　　1.3 仪器HH-S恒温水浴锅(金坛市亿通 电子 有限公司)，RE52-05旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)，KQ-250B型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），智能热板仪(山东省医学 科学 院设备站)。 　　 2 方法和结果 　　2.1 细辛各提取物的制备与配制［3］取细辛干燥全草药材4 kg，用75%乙醇浸泡24 h后，回流提取3次，浓缩成浸膏，加水溶解，于索氏提取器中依次用石油醚、醋酸乙醋、正丁醇萃取，至提取液无色，回收各萃取部位溶剂，得到石油醚萃取物、醋酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物及水相部分浸膏，精密称取所得各部位浸膏,用纯化水配成一定浓度的溶液备用。具体过程及结果见图1。表1 细辛各提取（物热板）法对小鼠热刺激疼痛的影响（略）与生理盐水比较，﹡Plt;0.05,﹡﹡Plt;0.01；与给药前比较，△Plt;0.05,△△Plt;0.01；n=10 　　2.2 细辛各提取物对小鼠热刺激性疼痛的影响［4］选用18～22 g雌性昆明种小鼠进行实验,实验前将小鼠预先置于（55±1）℃的热板仪上测痛阈,以舔后足为痛阈时间点,每只测1次,记录出现舔足的时间作为痛阈值。剔除喜跳跃者和舔足时间不足5 s或超过30 s者,共筛得合格小鼠70只,将其随机分成6组,每组10只，分别为生理盐水组、阿司匹林组、石油醚组、醋酸乙酯组、正丁醇组、水相组。1 d后开始给药，在给药之前每只小鼠再测1次痛阈值，将此痛阈值与该只小鼠筛选时的痛阈值取平均值,以此平均值作为该只小鼠在给药前的正常痛阈值。给药1次/d，连续给药7 d。分别在末次给药后30，60，90 min时间段用热板仪测定小鼠出现舔足的时间, 超过60 s不舔足者按60 s计。比较用药前后各组出现舔足时间和用药后各组间出现舔足时间作为动物疼痛反应的指标。统计处理，采用单因素方差分析，以SPSS for in达高峰，至少维持90 min以上。 　　2.3 细辛各提取物对冰醋酸诱发小鼠扭体反应的影响［4］18～22 g昆明种小鼠，实验前预先用0.8％冰醋酸0.2 ml腹腔注射，以其15 min内扭体次数作为痛阈值，取15 min内扭体次数在10～60次之间的小鼠做为实验对象，共筛得合格小鼠70只，雌雄各半。将其随机分为6组,每组10只。分组同“2.2”项。常规饲养3 d后开始灌胃给药，给药量均为0.01