老年胆固醇结石患者载脂蛋白E基因多态性分析.docVIP

　　老年胆固醇结石患者载脂蛋白E基因多态性分析 作者：向红 胡靖 陈淑华 周军 田韵 周丽 闾宏伟 【摘要】 目的 探讨载脂蛋白E(ApoE)基因多态性在老年胆固醇结石发病中的意义。方法 采用聚合酶链反应限制性片段长度多态性分析方法(PCRRFLP)，检测92例老年胆囊胆固醇结石患者和98例健康老年人的ApoE基因多态性及等位基因频率，对两组基因表型及等位基因频率进行统计学分析。结果 老年胆囊胆固醇结石患者组ApoE基因型ε3/4的频率26.1%(24/92)明显高于健康老年人对照组6.1%(6/98)(Plt;0.05)，老年胆囊胆固醇结石患者组ε4等位基因频率为32.7%，明显高于健康老年人对照组的21.4%(Plt;0.05)。结论 ApoE基因多态性与老年人胆囊胆固醇结石的发病相关;等位基因ε4是老年胆囊胆固醇结石形成的危险因素。 【关键词】 载脂蛋白E;胆固醇结石;等位基因 　　【Abstract】 Objective To study the relationship betorphisms of apolipoprotEin E (ApoE) and cholesterol calculus in the elderly. Methods The polymerase chain reactionrestriction fragment length polymorphism (PCRRFLP) technique orphisms of ApoE gene and allele frequencies in 92 elderly patients orphism frequencies in cholesterol calculus group orphisms are relative to cholesterol calculus and allele ε4 is a risk factor in elderly cholesterol calculus patients. 　　【Key ega公司。 　　1.3 方法 　　1.3.1 基因组DNA提取 采取外周静脉全血2 ml，EDTA抗凝，取300 μl抗凝全血，用DNA提取试剂盒(Genomic DNA Purification Kit)提取基因组DNA。 　　1.3.2 PCR扩增 PCR反应体积为100 μl，基因组DNA 2 μl(100 ng),10 mmol/L dNTP 4 μl，0.05 nmol/L p1引物2 μl，0.05 nmol/L p2引物2 μl，10×buffer 10 μl，5 U Taq酶，100%二甲基亚砜(DMSO)10 μl。PCR反应条件：95℃预变性5 min，变性95℃ 30 s，退火65℃ 30 s，延伸72℃ 30 s，共33次循环，延伸72℃ 5 min。ApoE基因扩增全长预计292 bp。 　　1.3.3 RFLP分析 酶切体系为30 μl ：PCR产物10 μl，10×HhaⅠ buffer 3 μl，20 U HhaⅠ内切酶，补充双蒸水至30 μl，于37℃水浴中酶切4 h。取酶切产物30 μl，经12%聚丙烯酰胺凝胶电泳分析，电压80 V，电泳8 h，溴化乙锭染色，于SYNGENE凝胶成像系统下观察结果。 　　1.4 统计学处理 采用SPSS11.0统计软件包，ApoE基因型频率和等位基因频率分布以百分率(%)表示,分类资料采用χ2检验。 　 　2 结 果 　　老年胆囊胆固醇结石患者组和对照组DNA标本经PCRRFLP后12%聚丙烯酰胺凝胶电泳检测可出现6种不同的带型，纯合子ε2/2在91 bp、83 bp、61 bp出现电泳条带;纯合子ε3/3在91 bp、61 bp、48 bp、35 bp出现电泳条带;纯合子ε4/4在72 bp、61 bp、48 bp、35 bp出现电泳条带;杂合子ε2/3在91 bp、83 bp、61 bp、48 bp、35 bp出现电泳条带;杂合子ε2/4可在91 bp、83 bp、72 bp、61 bp、48 bp、35 bp出现电泳条带;杂合子ε3/4在91 bp、72 bp、61 bp、48 bp、35 bp出现电泳条带;见表1,图1。根据此判断标准，分析胆囊胆固醇结石患者92例和正常人98例的ApoE基因型，并 计算 其三个等位基因频率(见表2)。结果表明，胆囊胆固醇结石组的ε3/4基因型频率(26.1%)和ε4等位基因频率(32.7%)均高于对照组。表1 不同ApoE基因型经HhaⅠ酶切后的DNA片段大小表2 各组ApoE基因型及等位基因频率分布 　　 3 讨 论 　　ApoE主要在肝细胞内合成，但许多肝外细胞包括巨噬细胞