代谢工程的设计思路.ppt

代谢工程的设计思路 代谢工程和基因工程关系 代谢工程作为第三代基因工程； 代谢工程利用重组DNA技术来对特定的生化反应进行修饰或引入新的反应以定向改进产物的生成或细胞的性质。 代谢工程是采用重组DNA技术和应用分析生物学相关的遗传学手段进行有精确目标的基因操作，改变微生物原有的调节系统，从而实现目的代谢活性的提高。 设计思路 代谢工程研究的目的在于构建具有新的代谢途径，能生产特定目的代谢产物或具有过量生产能力的工程菌应用于工业生产。 根据微生物不同代谢特性，常采用三种方法为： 改变代谢流； 扩展代谢途径； 构建新的代谢途径 设计思路 一、改变代谢流 1、加速速度限制反应； 确定代谢途径中限速反应及其关键酶； 构建高效表达系统 2、改变分叉代谢途径的流向 提高代谢分叉点的某一个代谢途径酶系的活力，已得到高产的末端代谢产物。 3、构建代谢旁路 用代谢工程方法还可以阻断或降低副产物的合成，特别是有毒产物的产生。 例：Imgram将运动发酵单胞菌（Zymomonas mobilis）的丙酮酸脱羧酶基因和乙醇脱氢酶基因克隆到大肠杆菌中，结果使转化子不积累乙酸而产生乙醇。 4、改变能量代谢途径 通过改变能量代谢途径或电子传递系统间接地增大或改变代谢流。 例： Chen等成功地通过导入血红蛋白基因，提高酿酒酵母的乙醇产量。血红蛋白是通过影响电子传递链间接影响线粒体的乙醛岐化途径而起作用的。 二、扩展代谢途径 代谢工程研究中可引入外源基因扩展、延伸原来的代谢途径，产生新的末端代谢产物，提高产率等，或者利用新的底物作为生物合成的原料。 例：将淀粉酶基因导入酿酒酵母中，改善乙醇发酵、简化工艺、降低成本，除了淀粉外，以纤维素、木质素为发酵原料的代谢工程研究已取得一定进展。 三、转移或构建新的代谢途径 构建或转移新的生物合成途径，以产生具有新的化学结构的末端代谢产物是代谢工程研究的一个重要目标，并将开辟一条产生新抗生素的途径。 1、转移代谢途径 例：为了利用大肠杆菌生产聚羟基丁酸（PHB），将好菌产碱菌的PHB操纵子（包括编码PGB多聚酶、硫解酶和还原酶的基因）克隆到大肠杆菌中，所构建的工程菌当氮源耗尽时能积累大量PHB，产量可达细胞总量的50%。 2、构建新的代谢途径 克隆异于自身次级代谢产物的基因可生产具新结构的代谢产物。 例：Hopwood等将放线菌红素的生物合成基因导入Granaticin和Medermycin产生菌中，所构建的工程菌可积累具有新结构的杂合抗生素Dihydrogranaticin 和MederrhodingsA. * * * * * * * * * * 典型的获得目的产物的途径往往需要通过几个分支点，而进入合成目的产物的途径，这些分支点即是中间产物。 在代谢流的分支点上，它们有共同的供应源，如：物质吸收、酶系统、转移系统或者共同的核糖体，要想获得 最高量的目的产物，必须使分支点上的中间产物或前体物最大量地流向目的途径的中间产物的量。 ￥￥典型的获得目的产物的途径往往需要通过几个分支点，而进入合成目的产物的途径，这些分支点即是中间产物。 在代谢流的分支点上，它们有共同的供应源，如：物质吸收、酶系统、转移系统或者共同的核糖体，要想获得 最高量的目的产物，必须使分支点上的中间产物或前体物最大量地流向目的途径的中间产物的量。 $$ 增加限速酶拷贝有时并不有效，通过控制整个调节途径中酶活性于一定水平来增加所需要的代谢流量，而保持其他代谢流量不变，往往更加有效。 双乙酰是红葡萄酒和啤酒的正常风味成分 在啤酒中，双乙酰的口味阈值很低（0.1 mg/L） 传统的啤酒酿造中，啤酒酵母产生的双乙酰在发酵后期被重新吸收还原为丁二醇，达到啤酒口味成熟的目的。（后酵时间长） 后酵期，酵母数量少，温度低，还原双乙酰速度慢，造成后酵时间长。 * * *