微珠芯片免疫法对肉制品中莱克多巴胺残留的检测.pdfVIP

第39卷第4期 当 代 化 工 Vo1．39，No．4 2010年 8月 ContemporaryChemicalIndustry August，2010 微珠芯片免疫法对肉制品中 菜克多巴胺残留的检测术 胡 磊，左 鹏，叶邦策 (华东理工大学生物工程学院，上海 200237) 摘 要： 构建了一个基于功能化微珠表面竞争性免疫反应的流控芯片体系，在环氧化微珠表面固定小 分子莱克多巴胺的蛋白全抗原，然后依次与一抗和携带荧光的二抗反应，最后输出荧光信号。在检测中，采用 内标一标准曲线法，先利用标准品制作竞争性免疫反应的标准曲线，然后进行实际样本检测。该系统检测的 莱克多巴胺的最低检测限达到0．03 g／L，检测时间不超过45min。 关 键 词： 微珠芯片；环氧化 ；莱克多巴胺；兽药残留；最低检测限 中图分类号： O658 文献标识码： A 文章编号： 1671—0460(2010)04—4081—04 莱克多 巴胺 (RaetopamineHydrochloride，RA 胺 的大规模检测。 C)，属 B一肾上腺素兴奋剂 (p一兴奋剂)类药物中 1 实验部分 的苯乙醇类衍生物，是通常所说的瘦肉精 ，具有显 著提高胴体瘦肉率，改善动物饲料利用效率的生产 1．1 实验装置 性能。莱克多巴胺也能提高饲喂动物的瘦肉率 ，但 微珠芯片在线检测系统如图1所示，本系统包 因其危害大，我国已禁止使用f1]。畜禽饲喂莱克多巴 括蠕动泵，微珠芯片，六通 阀，以及相关管路，其 中 胺对动物和人都会产生危害，对动物的危害表现在 中间的六通阀为枢纽控制整个免疫检测过程，图1 长期使用后易引发肌肉震颤，四肢和面部肌肉最明 中2种状态分别显示洗涤，进样 图1(a)和循环反应 显，对人危害表现为人吃了残留有莱克多巴胺的组 图 1(b)。 织后可能会出现中毒症状，通常表现为面色潮红、 蠕动泵 蠕动泵 头晕、心悸、四肢麻木等不 良反应，对有心血管病的 硅 患者危害更大，严重的危及生命，我国已严禁在饲 料中添加使用2_【，并且世界各国都在积极开发检测 莱克多巴胺的办法 。 微 目前检测莱克多巴胺的方法主要有高效液相 色谱法，毛细管电泳法 ，酶联免疫法等等，虽然检测 (a) (b) 方法多种多样 ，但普遍存在检测仪器昂贵，操作繁 图1 实验装置示意图 琐等缺点，为此采用了一种新的生物芯片法一微珠 Fig．1 Schematicofsetup 芯片法来进行检测分析。近年来 ，生物芯片作为一 1．2 试剂和仪器 种新型的生物材料和实验方法得到了广泛的应用 Tweem20；1，4一丁二醇二缩水甘油醚，美 国 [31， 生物芯片有多种形式，包括微阵列芯片和微流控 Sigma公司；小牛血清 白蛋 白，美国Sigma公司；莱 芯片，本文研究的是一种类似于微流控的微珠载体 克多巴胺标准品，二氧化硅微珠 ，氨基显色剂 芯片，这种基于竞争免疫反应原理的微珠载体芯片 TNBS，莱克多巴胺单克隆抗体 ，美国Biodesign公 测定方法具有灵敏度高、特异性强、通量高、试剂用