无需离心的微孔板凝聚胺法在新生儿溶血病中的应用.doc

无需离心微孔板凝聚胺法应用于输血前检查效果评价 刘景春1 车嘉琳1 陆小梅2 刘赴平1（1 东莞市中心血站 广东 东莞523930，2 东莞石龙博爱医院广东 东莞，523320） 摘要：目的 评价无需离心的微孔板凝聚胺法在输血前检查中的应用效果。方法 采用无需离心的微孔板凝聚胺法、传统的凝聚胺试管法和微柱凝胶卡技术3种方法同步对输血前检测标本按照规定进行相关检测，比较3种方法输血前检测时间的差异；对临床常见的9种抗体血清进行滴度分析，以及对已经鉴定的21例不规则抗体标本和40例红细胞亚型标本进行检测，比较对已知的抗体检出能力。结果 3种方法中，检测时间总体上都是微柱凝胶卡技术最长；进行单个交叉配血标本检测时，无需离心的微孔板凝聚胺法长于凝聚胺试管法（F=148.672，P=0.00），随着标本的增加，微孔板法明显短于其它2种方法（5个标本：F=310.661，P=0.00；9个标本：F=140.779，P=0.00）；对抗体检出能力上，检测抗体滴度方面，3种方法两两比较均没有统计学差异（统计概率P值分别为0.068、0.753和0.674）；对以前鉴定的抗体微孔板凝聚胺法具有很好的检出能力。结论 无需离心的微孔板凝聚胺法无需试管及离心设备，具有简便快速、经济有效等特点，是一种可行的输血前检测方法。 关键词： 凝聚胺；微孔板；无需离心；输血前检查 目前进行交叉配血用的方法主要有以下几种：盐水法、凝聚胺试管法、抗球蛋白法和微柱凝胶法，其中抗球蛋白法是经典的交叉配血方法，为金标准，但是由于操作烦琐、费时长而且重复性差等原因难以作为交叉配血的常规方法，尤其难以进行大标本量检测；微柱凝胶卡技术是改良的经典抗球蛋白法，操作简便、灵敏度好、特异性高及人为主管因素少等特性受到大家的亲睐，但是由于价格昂贵，目前在经济上难以大规模开展。凝聚胺试管法由于其操作简便、费时短、检测效率高及经济实惠，目前广泛应用于输血前检测[1-3]。 我们通过对经典的凝聚胺试管法进行改良，建立了无需离心的微孔板凝聚胺法[4]，该方法保持了传统凝聚胺试管法的优点，同时省却了试管和离心机等设备，无需离心等步骤，使操作更加简便、易行。尤其对于一些突发情况，如断电、离心机损坏，或偏远落后地区缺乏设备，无法进行凝聚胺试管法等情况下具有非常重要的意义。 此前我们对建立的无需离心的微孔板凝聚胺法灵敏度等指标进行了一些初步探讨[5]，本研究进一步优化无需离心的微孔板凝聚胺法反应体系进行输血前检查，对该方法进行综合评价，现报道如下。 1 材料与方法 1.1 材料 凝聚胺试剂盒(台湾贝索产品)；不规则抗体筛选细胞和鉴定细胞(上海生物医药有限责任公司)；抗球蛋白试剂、抗-D、抗-E、抗-C、抗-D、抗-c、抗-K、抗-Jka、抗-Jkb、抗-Fya、抗-Fyb（英格兰诊断试剂公司）；5×10微孔板（图1）委托本地塑胶公司制备；细胞洗涤离心机为日本KUBOTA公司产品。 图1 自行设计的5×10微孔板 促凝液主要成分为Polybrene?（Sigma公司，美国）。重悬液主要成分枸橼酸钠和葡萄糖。人源性抗体标本来源于东莞市各医疗单位抗体筛选阳性并采用谱细胞鉴定后-80℃保存的患者血清标本；交叉配血标本来源于石龙博爱医院输血科输血前检测标本。 1.2 方法 1.2.1 无需离心微孔板凝聚胺法 （Microplate Polybrene without a centrifuge, MPWC），根据以前建立的方法稍加改进[4, 5]。 致敏阶段：标记好微孔板，每块微孔板设计1个阳性对照，1个阴性对照。每孔分别加入2滴待检血清或标准血清，1滴10%的标准红细胞或待检红细胞，然后加入3滴低离子液，用手工混合，室温放置1min。 凝集阶段：每孔加入2滴凝聚胺工作液，手工振荡混合，或者采用振荡仪混合4~5min，可见所有的标本都出现凝聚。 重悬阶段：加入2滴重悬液，采用手工轻轻振荡混合，或者采用振荡仪混合30s，至阴性对照孔非特异性凝聚消失。 1.2.2　凝聚胺试管法（Polybrene Tube Method，PTM） 血清2滴加3%红细胞悬液1滴，室温放置1min，加0.6 mL低离子介质液，室温放置1 min，1300 rpm离心15 s，肉眼观察结果，肉眼未见凝集显微镜下观察。 1.2.3　微柱凝胶卡技术（Microcolumn Gel Test，MGT） 采用DianaSol 2（厂家配套的低离子溶液）配制1%的红细胞悬液，每份加50 μL1%的献血员红细胞悬液到相应的微柱中，然后加入25 μL的血清，37℃下孵育15 min后在专用离心机上离心10 min。 1.2.4 结果判断 抗体筛选试验阴性，交叉配血主、次侧都相合，可以输注。抗体筛选试验阳性，交叉配血主、次侧都相合，应进行抗体鉴