最后引起细胞凋亡.ppt

BCL-2家族成员 坏死细胞 凋亡细胞 染色质压缩并分离，细胞质固缩 细胞核碎裂起泡，细胞碎裂 吞噬 细胞色素c诱导的凋亡细胞DNA电泳图 1．细胞色素c诱导0 h 2．细胞色素c诱导1 h 3．细胞色素c诱导2 h 4．细胞色素c诱导3 h 5．细胞色素c诱导4 h 6．阴性对照 7．Marker 细胞凋亡的通路死亡受体通路线粒体通路内质网通路 Fas/FasL死亡通路Fas又称CD95，是由325个氨基酸组成的受体分子，Fas和配体FasL结合后，可通过Fas分子启动致死性信号转导，最终引起细胞一系列特征性变化，使细胞死亡。Fas作为一种普遍表达的受体分子，可出现于多种细胞表面，Fas分子胞内段带有特殊的死亡结构域DD(death domain)。三聚化的Fas和FasL结合后，使三个Fas分子的死亡结构域相聚成簇，通过死亡结构域DD活化接头蛋白FADD （Fas-associated protein with death domain）, FADD是死亡信号转录中的一个连接蛋白，它由两部分组成：C端（DD结构域）和N端（DED）部分。其DD结构域负责和Fas分子胞内段上的DD结构域结合，该蛋白再以DED(death effector domain)与caspase-8酶原中的DED相互作用，募集caspase-8的分子到Fas区域，Fas、FADD和caspase-8形成了死亡诱导信号复合体(death-inducing signaling complex，DISC),caspase-8酶原自我剪切活化成活性caspase-8。活化的caspase-8激活下游的caspases-3、caspases-6和caspases-7，剪切胞浆和核底物，使细胞发生凋亡。 细胞凋亡的线粒体途径 细胞色素C与细胞凋亡 细胞色素C是一种水溶性蛋白，位于线粒体内外膜之间，并与内膜松弛相连。它具有双重功能，除参与电子传递外，还是调控细胞凋亡的一种主要蛋白。在线粒体损伤后，细胞色素C从构建的孔隙中进入细胞液，与Apaf-1(Apoptotic protease activating factor-1)和Caspase-9组成了凋亡复合体。在Caspase-9被激活后，再作用于其下游的Caspase-3酶原，活化的Caspase-3作为效应子，作用于不同的靶细胞，经蛋白水解作用导致细胞凋亡。 BCL-2家族独立改变线粒体膜的通透性 结构上，BCL-2家族蛋白与白喉毒素孔形成区域相似。这个发现使一些研究者得到灵感，他们认为这些蛋白能插入生物膜中，形成离子转导通道。Kuwana等（2002）用原子显微镜观察到，由二维脂质双层中的Bax所形成的大孔道。Saito等发现重组的Bax可以独自从完整的脂质体中释放出用荧光标记的细胞色素c；并且计算的结果显示，这个通道是由4种Bax分子组成，它的直径正好使细胞色素c分子通过。 一些研究者认为，孔道的形成是由于：在细胞凋亡时，Bax和Bak寡聚到线粒体的外膜上。Bid经Caspase-8修剪或重组后，到达线粒体外膜，并寡聚到Bax和Bak上，这种寡聚可能对膜渗透性的改变起着重要的作用。这个过程很像细胞膜的镶边和内嵌，寡聚化在一定程度上增加了细胞膜的弯曲力，使得油脂孔道形成。Bcl-2和Bxl-x能够阻止Bax和Bak寡聚化， 从而使油脂孔道关闭。 最新的研究集中在细胞内Ca2+的调动和它对线粒体PT孔道形成的影响上。Tian（2003）通过实验证明：PT孔道的形成，首先是某种凋亡刺激使Ca2+从内质网中被释放，然后引起线粒体中Ca2+的超负荷（正常条件下，线粒体可以摄取并贮存较大量的Ca2+ ，以免胞质中的Ca2+浓度过高。如较高的Ca2+浓度， Ca2+循环则成为线粒体的负担 ），并导致线粒体PT孔道的形成和母体的膨胀。结果，线粒体的外膜破裂，膜间隙（IMS）中的促凋亡的蛋白流入细胞质中。 研究指出，Ca2+的信号传导和BCL-2家族蛋白对线粒体外膜的作用之间有一个潜在的关联。调解这一过程的BCL-2家族蛋白，不是那些作用在线粒体上的，而是定位在内质网上的那些蛋白。例如，Bcl-2蛋白可以减少Ca2+从内质网中的释放，而Bax和Bak的作用与此相反，它们增加Ca2+从内质网中的释放量。 内质网通路有证据表明细胞内还存在另一条凋亡通路。Nakagawa等发现Caspase-12存在于内质网，当内质网钙离子动态平衡被破坏或者过多蛋白聚集于内质网时可激活Caspase-12，激活的Caspase-12可进一步剪切Caspase-3，从而引发细胞的凋亡。 ●细胞凋亡的概念及其生物学意义 ●细胞凋亡的形态学和生物化学特征 ●细胞凋亡的分子调控机理 第十二章 细胞