陈香露白露片微生物限度检查方法验证研究.docVIP

　　陈香露白露片微生物限度检查方法验证研究 【摘要】 　　目的：建立陈香露白露片微生物限度检查方法。方法：根据该样品的微生物限度标准，按《 中国 药典》2005年版一部附录微生物限度检查法的验证试验指导原则，用委托厂家3个批号的陈香露白露片进行验证试验，以考察确定陈香露白露片微生物限度的检查方法。首先用常规法进行预试验，初步考察该样品对试验菌检测的影响，然后根据预试验结果，用离心沉淀集菌法进行再试验。结果：常规法试验时，大肠埃希菌、白色念珠菌的回收率均大于70%，而金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的回收率小于70%，控制菌检查检出试验菌。采用离心沉淀集菌法试验时，可以有效消除抑菌作用，使金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的回收率大于70%。结论：采用离心沉淀集菌法可以有效消除抑菌作用，简便、准确。 【关键词】 微生物限度检查 验证试验 离心沉淀集菌法 　　Validation of Microbial Limit Test for Chenxianglubailu Tablets 　　YIN Chunrong, SUN Ping, XIAO Juli 　　（The Institute of Food and Drug Control, Yunnan Chuxiong 675000, China; Yunnan Longfa Pharmaceutical Limited pany, Yunnan Chuxiong 675000, China） 　　［Abstract］ Objective: To establish a microbial limit test method for Chenxianglubailu tablets. Methods: The microbial limit test for Chenxianglubailu tablets icrobial limit standard for this product and the principle of the validation of microbiological test in “Chinese PharmacopoEia” (2005), and tested in three batches of Chenxianglubailu tablets. The test ethods. Results: UG培养基、胆盐乳糖发酵培养基、营养肉汤培养基、改良马丁培养基。 　　1.3 菌种 　　金黄色葡萄球菌［CMCC（B）26003］、大肠埃希菌［CMCC（B）44102］、枯草芽孢杆菌［CMCC（B）63501］、白色念珠菌［CMCC（F）98001］，均来源于云南省食品药品检验所。 　　 2 验证试验 　　2.1 试验菌液的制备 　　接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，置30～35 ℃培养18～24 h，分别取上述培养物 1 mL，加0.9%无菌氯化钠溶液 9 mL，10倍递增稀释，取稀释液1 mL，加入到1个平皿中，每种菌的每1个稀释级平行制备2个平皿，倾注营养琼脂培养基，置30～35 ℃培养24～48 h，计数，选择每1 mL含菌数为50～100 cfu的稀释级菌悬液，作为验证试验用菌悬液。接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中，置23～28 ℃培养24～48 h，取上述培养物1 mL，加0.9%无菌氯化钠溶液9 mL，10倍递增稀释，取稀释液1 mL，加入到1个平皿中，每1个稀释级平行制备2个平皿，倾注玫瑰红钠琼脂培养基，置23～28 ℃培养72 h，计数，选择每毫升含菌数为50～100 cfu的稀释级菌悬液，作为验证试验用菌悬液。 　　2.2 供试液的制备 　　从两瓶样品中取样品10 g，至灭菌匀浆杯中，加pH 7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液至100 mL，经匀浆仪混匀，制成1∶10的供试液。陈香露白露片3个批号样品同法操作。 　　2.3 细菌数、霉菌及酵母菌数计数方法的验证 　　2.3.1 预试验（常规法） 　　（1）试验组：取1∶10的供试液1 mL，加入到1个平皿中，同法制备8个平皿，依次加入金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌的菌悬液1 mL（含50～100 cfu），每种菌平行制备2个平皿；取1∶100的供试液1 mL，加入到1个平皿中，同法制备8个平皿，依次加入金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌的菌悬液1 mL（含50～100 cfu），每种菌平行制备2个平皿；取1∶1 000的供试液1 mL，加入到1个平皿中，同法制备8个平皿，依次加入金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌的菌悬液1 mL（含50～1